油菜Oleosin基因克隆及其与GUS基因融合子表达载体的构建

摘要

构建合适的油脂蛋白融合子(oleosin-fusion)表达载体,不仅有助于推动植物生物反应器的发展,还可以用于雄性不育、自交不亲和、抗病虫、花粉营养、作物高产和基因工程安全性等方面的研究,具有重要的实践价值和理论意义.因此,该论文开展了油脂蛋白基因克隆、油脂蛋白融合子表达载体构建等方面的研究.论文研究内容与结果如下:1.油菜oleosin基因OTS的克隆与序列分析;2.Oleosin基因OTS与GUS基因的融合及融合蛋白性质预测;3.构建了3个OTS-GUS融合子植物表达载体;4.OTS-GUS融合子GUS基因瞬时表达的检测.

目录

一.文献综述

1.1植物生物反应器

1.1.1基本概念与表达系统

1.1.2植物生物反应器的优势

1.1.3利用植物生物反应器生产大分子物质

1.1.4用于植物生物反应器的植物

1.1.5问题与对策探讨

1.2油体和油体相关蛋白

1.2.1油体大小、结构与组成

1.2.2油体相关蛋白

1.2.3油体的形成与分解及其生物学功能

1.3油体蛋白Oleosin

1.3.1 Oleosin的组成、类型与分布

1.3.2 Oleosin的结构和功能

1.3.3 Oleosin基因及其表达

1.3.4 Oleosin在基因工程方面的应用

二.引言

三.材料与方法

3.1实验材料

3.1.1植物材料

3.1.2菌种和质粒

3.1.3主要试剂

3.1.4主要仪器

3.1.5培养基

3.1.6常用溶液

3.2方法

3.2.1植物总DNA的提取(CTAB法）：

3.2.2 PCR引物设计

3.2.3目的基因的聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR)

3.2.4重组子的鉴定

3.2.5序列分析与结构预测的方法

3.2.6农杆菌的培养与活化

3.2.7植物细胞转化

3.2.8 GUS活性的组织染色法

3.2.9大肠杆菌质粒DNA的提取

3.2.10农杆菌质粒DNA的提取(碱裂解法）

3.2.11质粒DNA的纯化

3.2.12 DNA限制性内切酶反应

3.2.13 DNA片段的连接

3.2.14 DNA片段的回收

3.2.15大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

3.2.16农杆菌感受态的制备及转化

四.结果与分析

4.1油菜Oleosin基因OTS的克隆与序列分析

4.1.1 PCR扩增及其产物克隆鉴定

4.1.2 PCR扩增片段的序列测定与分析

4.2 Oleosin基因OTS与GUS基因的融合及融合子序列分析

4.2.1融合子重组质粒pUC-OTS-GUS的构建

4.2.2融合子重组质粒pUC-OTS-GUS的酶切验证

4.2.3融合子OTS-GUS的序列分析

4.3 OTS-GUS融合蛋白结构与性质预测分析

4.3.1理化特性曲线预测

4.3.2二级结构预测

4.3.3跨膜区和潜在信号肽切割位点预测

4.4 OTS-GUS融合子植物表达载体的构建

4.4.1 OTS-GUS融合子35S启动子植物表达载体pBI35S-OTS121的构建

4.4.2 OTS-GUS融合子Lea启动子植物表达载体pBI-Lea-OTS121的构建

4.4.3 OTS-GUS融合子Napin启动子植物表达载体pBI-Napin-OTS121的构建

4.5 OTS-GUS融合子中GUS基因瞬时表达的检测

五.讨论

5.1扩增获得的OTS基因特点与功能

5.2基因融合及其预测分析

5.3融合子OTS-GUS基因启动子的选用

5.4 Gus基因的瞬时表达

六.结论

参考文献

缩略词表

附录

致谢