WISP2基因过表达对食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

摘要

目的：探讨WISP2基因过表达对食管癌细胞生物学功能的影响及可能涉及的分子机制。
　　方法：分别构建WISP2基因过表达质粒和含空质粒载体的阴性对照组，使用Lpofectamin2000瞬时转染低分化食管癌细胞E109，利用实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）和蛋白印记（Western blot, WB）技术在基因及蛋白水平检测WISP2在E109-WISP2组（转染组）、E109-空质粒组（转染空质粒组）和E109-空白组（未转染WISP2质粒组）的表达；应用CCK8检测WISP2基因过表达前后细胞的增殖能力变化、Transwell小室和Matrigel基质胶检测WISP2基因过表达前后细胞侵袭、迁移能力的变化；qPCR、Western blot技术检测各组细胞ERK-1/2、Slug和E-cadherin的RNA和蛋白的表达水平的变化。
　　结果：瞬时转染E109-WISP2组中WISP2基因mRNA表达(66.07±12.34)与E109-空质粒组(1.17±0.09)和 E109-空白组相比明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05），而E109-空质粒组和E109-空白组WISP2基因表达无明显差异（P>0.05）；E109-WISP2组中WISP2蛋白表达水平与E109-空质粒组及E109-空白组相比明显升高，和两对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。CCK8法检测结果显示E109-WISP2组(0.225±0.003)与E109-空质粒组(0.26±0.003)及E109-空白组(0.26±0.001)相比增殖能力明显降低，和两对照组相比差异有统计学意义（P<0.05），而E109-空质粒组和E109-空白组无明显差异（P>0.05）；Transwell小室侵袭实验显示WISP2过表达后食管癌细胞穿透Matrigel基质胶的细胞数（26.60±4.81），显著低于E109-空质粒组（53.20±4.32）及E109-空白组(56.00±4.90)，差异具有统计学意义（P<0.05）；而E109-空质粒组和E109-空白组相比无明显差异（P>0.05）。Transwell小室迁移实验显示WISP2过表达后癌细胞通过聚碳酸酯微孔滤膜的细胞数（55.20±4.52），显著低于E109-空质粒组（95.5±4.79）及E109-空白组(99.60±5.78)，差异具有统计学意义（P<0.05）；而E109-空质粒组和E109-空白组相比无明显差异（P>0.05）。 qPCR及Western blot检测结果显示E109-WISP2组细胞与E109-空质粒组和E109-空白组相比， ERK-1/2、Slug表达降低，而E-cadherin表达升高。
　　结论：WISP2基因的过表达能明显降低食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力；WISP2基因过表达能降低ERK-1/2、Slug的表达及提高E-cadherin的表达；WISP2基因可能通过调节ERK1/2的表达抑制食管癌细胞的增殖能力；通过调节Slug和E-cadherin的表达抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。

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引言

材料与方法

1.材料和方法

1.1主要试剂

1.2 主要试剂的配制

1.3 主要仪器

1.4 细胞培养

1.5 Pex-2-hWISP2质粒瞬时转染E109细胞株

1.6 real time PCR检测过表达WISP2前后各组细胞WISP2、ERK1、ERK2、Slug和E-cadherin mRNA的表达

1.7 Western bloting 检测各组细胞WISP2、ERK1/2、Slug和E-cadherin 蛋白的表达情况

1.8 CCK8检测癌细胞增殖能力

1.9 Transwell 侵袭实验

1.10 细胞迁移实验

1.11 统计学分析

结果

1 real time PCR检测各组癌细胞中WISP2基因表达情况

2 WB检测各组细胞中WISP2蛋白的表达

3 CCK8法检测各组癌细胞的增殖能力

4 WISP2基因过表达对各组细胞侵袭能力的影响

5 WISP2基因过表达对各组细胞迁移能力的影响

6 瞬时转染WISP2 后各组细胞中ERK-1、ERK-2、Slug、E-cadherin的mRNA 的表达

7 WISP2基因过表达后各组细胞中ERK-1/2、Slug、E-cadherin的蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

致谢

附录A 中英文缩写对照表

附录B 就读研究生期间发表文章：

附录C 综述:上皮间质转化转化诱导因子与转移性癌