植物（大葱）谷胱甘肽过氧化物酶分离纯化的探索

摘要

本研究采用测定GSH-Px的间接法Ⅱ检测了大葱、蒜、洋葱、姜、银杏老叶和新叶以及草珊瑚中的酶活性。其中大葱中GSH-Px活性最高，且大葱较易获得，不受季节限制，所以本实验选择了大葱作为GSH-Px分离纯化的材料。　　大葱GSH-Px主要集中在40﹪～80﹪饱和度(NH4)2SO4范围内盐析出来。大葱粗提液经(NH4)2SO4盐析和DEAE-Sepharose柱层析分离，得到了两种GSH-Px同工酶，即GSH-PxⅠ和GSH-PxⅡ。DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px温度曲线呈一钟罩形，符合酶促反应动力学曲线，最适温度范围为35℃～50℃。在20℃～45℃温度范围内，随着温度的升高，GSH-Px活力逐渐增大，因而反应速度也加快；当温度达到一定限度时(45℃以上)，温度升高虽然能使酶促反应速度加快。

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

1.1关于谷胱甘肽过氧化物酶

1.1.1 GSH-Px的分子结构

1.1.2 GSH-Px的作用机制

1.1.3 GSH-Px的生物学作用

1.1.4 GSH-Px的必需元素Se

1.1.5 GSH-Px与活性氧

1.1.6 GSH-Px活性的测定方法

1.1.7 GSH-Px的同工酶染色

1.1.8化学修饰剂对GSH-Px的的影响

1.1.9 GSH-Px的的研究进展

1.2不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶(non-Se-GSH-Px)

1.3关于植物酶的分离纯化

第二章引言

2.1立论依据

2.2技术路线

第三章材料与方法

3.1供试材料和仪器设备

3.1.1材料

3.1.2主要化学试剂

3.1.3主要仪器设备

3.2方法

3.2.1 GSH-Px酶活力的测定

3.2.2蛋白质含量的测定

3.2.3纯化前的准备

3.2.4 GSH-Px的分离纯化

3.2.5电泳

3.2.6 GSH-Px部分性质的测定

第四章结果与分析

4.1标准曲线的制作：

4.2纯化材料的准备

4.3大葱粗提液硫酸铵分段盐析范围的选取

4.4 GSH-Px的分离纯化

4.5 GSH-Px的部分性质研究

第五章讨论

5.1酶的保护剂

5.2 GSH-Px的沉淀

5.3分离纯化过程中层析柱的选择

5.4 GSH-Px的脱盐

5.5 GSH-Px活力测定方法

第六章结论

缩略语

参考文献

致谢

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