还脑益聪方对老年痴呆大鼠炎症因子和神经元Aβ相关结合蛋白的影响

摘要

老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)是1907年Alois Alzheimer首先发现并命名的一种神经系统退行性疾病。临床以大脑皮质获得性高级功能受损,即痴呆为主要特征,包括不同程度的记忆力、感觉能力、判断力、思维能力、运动能力等受损,以及情感反应障碍和性格改变。国外流行病学调查表明,65岁以上人群痴呆患病率为5％～7％,其中50％为AD。我国是世界上社会老龄化速度最快的国家之一,目前AD患者已有500万人,随着老龄人口的逐年增加,AD必将成为一个严重的社会问题和经济问题。由于目前AD的发病机制尚未完全明了,西医学缺乏行之有效的治疗方法。目前国内外治疗AD的西药大多数处于临床实验中,且长期服用这类西药易引起严重的毒副反应,损害肝肾等器官。中药复方因有多途径、多环节、多靶点、多向调节的作用优势,并且具有预防和治疗的双重作用,因此,从中医药方面探寻AD的有效治疗途径已成为国内研究的主要趋势。本文即通过实验观察中药还脑益聪方改善老年痴呆大鼠认知功能的效果,并探讨其作用途径及机理。
　　 目的:
　　 观察还脑益聪方对自然衰老的AD大鼠模型学习记忆能力、炎症因子IL-6及TNF-α、大鼠海马病理组织形态学以及NF-kB、ERAβ表达的影响,阐释还脑益聪方的作用机理和途径,为临床治疗AD提供实验依据。
　　 方法:
　　 1、老龄大鼠50只,通过Morris水迷宫筛选出学习记忆能力减退的老年大鼠40只,并按随机表数字随机分为4组,每组10只动物,即老年模型(痴呆)组,盐酸多奈哌齐组,中药(还脑益聪方)大剂量组,和中药(还脑益聪方)小剂量组,同时将学习记忆正常的老年大鼠和青年大鼠各10只设为老年对照组、青年对照组。
　　 2、老年模型组,不给药,灌胃等体积的自来水；盐酸多奈哌齐组,每日按0.45mg/Kg灌胃给予事先配置好的盐酸多奈哌齐混悬液；中药大剂量组每日灌胃给予还脑益聪方药液,13.68g生药/Kg；中药小剂量组每日灌胃给予还脑益聪方药液,6.84g生药/Kg；同时将老年对照组大鼠和青年对照组大鼠每日灌胃给予等体积自来水。各药物组按照剂量连续灌胃给药8周,1次/d。
　　 3、给药8周后,再进行Morris水迷宫测试,测定各组动物在水迷宫中寻找平台的时间、路线以及撤除平台后大鼠进出原平台区域的次数。行为学结束后腹主动脉取血,测定血清学指标。动物断头处死,取全脑分成左、右半脑,分离左侧海马,匀浆后测定其IL-6,TNF-α含量,右侧半脑行常规石蜡包埋、切片,HE染色后光镜观察海马形态学变化,免疫组化法分析海马NF-kB、ERAβ的表达。
　　 结果:
　　 1、与青年对照组大鼠比较,老年模型组大鼠的寻台路线长度、寻台时间及寻台次数均有显著延长或减少(P<0.05)。与老年对照组大鼠比较,老年模型组大鼠的寻台路线长度和寻台时间有显著延长(P<0.05)。说明老年模型组大鼠确实存在认知功能减退。
　　 与老年模型组大鼠比较,盐酸多奈哌齐组、中药大、小剂量组大鼠在寻台路线长度、寻台时间及寻台次数有显著减少或提高(P<0.05),表明还脑益聪方有明显改善AD大鼠学习记忆功能的作用。
　　 2、老龄大鼠脑组织病理形态结果显示,神经元细胞数量减少,海马区有片状软化灶,细胞较稀疏,排列较散乱。尤其老年痴呆大鼠更为明显,其锥体细胞层不完整,可见少量细胞胞体缩小,胞浆淡红色,胞核固缩深染。青年组大鼠海马的神经细胞密集,排列整齐,细胞结构清楚,细胞核及胞质清晰,各层细胞清晰,排列有序。
　　 中药大、小剂量组和盐酸多奈哌齐组经治疗后,大鼠海马的神经元细胞排列还是较为散乱,但细胞数量有所增加,细胞结构基本清析,细胞核及胞质可见。表明还脑益聪方可以改善AD大鼠的海马组织病理。
　　 3、与青年对照组大鼠比较,老年模型组大鼠的IL-6及TNF-α水平均显著增加(P<0.05)。老年模型组与老年对照组比较,IL-6水平显著增加(P<0.05),TNF-α水平有所增加,但无显著统计学意义。说明老年模型组大鼠脑内存在着炎症反应。
　　 与老年模型组比较,盐酸多奈哌齐和还脑益聪方大、小剂量组可以显著降低AD大鼠的IL-6、TNF—α水平(P<0.05,P<0.01),表明还脑益聪方对AD大鼠的炎症因子水平有抑制作用。
　　 4、实验结果显示,与青年对照组大鼠比较,老年模型组大鼠的ERAB阳性细胞数明显增多(P<0.05)。老年模型组大鼠ERAβ阳性细胞数高于老年对照组,但统计学比较无显著差异。老年AD大鼠经盐酸多奈哌齐和中药大、小剂量治疗后,ERAβ阳性细胞数显著降低(P<0.01,P<0.05),表明还脑益聪方可以抑制老年AD大鼠海马ERAβ的表达。
　　 与青年对照组大鼠比较,老年模型组大鼠的NF-kB阳性细胞数明显增多(P<0.05)。与老年对照组比较,NF-kB阳性细胞数增多,但无统计学意义。与老年模型组大鼠比较中药大、小剂量组的NF-kB阳性细胞数明显减少(P<0.01,P<0.05),表明还脑益聪方可以抑制老年AD大鼠海马NF-kB的表达,从而抑制AB在大鼠脑内的异常沉积,进而改善AD症状。
　　 结论:
　　 1、自然衰老的老年痴呆大鼠模型在行为学方面、炎症因子各项指标等方面更接近于AD的病变过程,符合临床病理特征。
　　 2.还脑益聪方可改善AD大鼠学习记忆功能。
　　 3.还脑益聪方可改善老年痴呆模型大鼠行为学、病理学、炎症介质、大鼠海马ERAβ和NF-kB的表达等各方面指标,这可能是其主要的疗效机制和作用途径。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略语

文献综述一

1 概述

2 老年性痴呆的发病机制

3 老年性痴呆的西医治疗

文献综述二

1 中医对AD病因病机的研究

2 中医药治疗AD的临床研究

3 中医药治疗AD的实验研究

实验研究

前言

实验材料

1 实验动物

2 药物与试剂

3 仪器

方法

1 动物模型

2 动物分组及给药

3 行为学测试

4 炎症因子测定

5 海马组织形态学观察

6 免疫组织化学测定

7 统计学处理

结果

1 还脑益聪方对老年痴呆大鼠学习记忆能力的影响

2 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马组织病理形态学的影响

3 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马ERAB表达的影响

4 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马NF-κB表达的影响

5 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马组织炎症因子的影响

讨论

1 还脑益聪方的药物组成特点

2 还脑益聪方对老年痴呆大鼠行为学的影响

3 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马组织病理形态学的影响

4 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马炎症因子水平的影响

5 还脑益聪方对老年痴呆大鼠海马内质网AB相关结合蛋白及NF-κB表达的影响

结论

参考文献

致谢

个人简历