无比山药丸对去除卵巢所致骨质疏松症大鼠骨髓中骨桥蛋白和肾上腺素能受体β-2表达的影响

摘要

目的：
　　 以去卵巢所致骨质疏松症大鼠为模型，采用骨组织形态计量学方法，观察无比山药丸对其的作用，并从骨形成调控因子-骨桥蛋白和肾上腺素能受体β-2蛋白的角度，部分揭示其作用机理，为中医药防治骨质疏松症提供进一步的科学依据。
　　 方法:
　　 选用雌性SD大鼠77只，先按体重随机分为3组:空白对照组12只，假手术组12只，造模组53只。造模组大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，摘除双侧卵巢，假手术组只摘取卵巢周围少许脂肪组织。术后15天，再按体重将造模大鼠随机分为4组:模型组13只、雷洛昔芬组13只、无比山药丸高剂量组14只、无比山药丸低剂量组13只。然后开始灌胃给药:雷洛昔芬组的给药剂量为5mg/kg;无比山药丸高、低剂量组的给药剂量分别为20g生药/kg、10g生药/kg。以上给药一天一次，连续6天，休息1天后，再连续给药6天，如此给药13周。空白对照组、假手术组、模型组按同法灌胃给予等体积的纯净水。
　　 分别在大鼠处死前15d和前3d腹腔注射盐酸四环素30mg/kg体重，以对骨进行荧光标记。给药结束后，用45mg/kg体重剂量的戊巴比妥钠给大鼠腹腔注射麻醉后，迅速将各组大鼠断头处死，取右侧胫骨，用4％多聚甲醛溶液固定，制作不脱钙骨切片，用于骨组织形态计量学检测。取左侧胫骨，制作冰冻切片，用于骨髓中骨桥蛋白和肾上腺素能受体β-2蛋白表达的检测。
　　 统计学方法:所得实验数据以均数±标准差((x)±s)表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。
　　 结果:
　　 1、无比山药丸对去卵巢大鼠骨组织形态计量学指标的影响。
　　 1.1、无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨TBV％的影响。
　　 模型组及各给药组大鼠胫骨TBV％较假手术组显著降低。与模型组比较，无比山药丸高、低剂量组TBV％显著升高;无比山药丸高、低剂量组之间比较无显著性差异。阳性对照（雷洛昔芬）组的TBV％显著高于模型组。
　　 1.2、无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨TRS％的影响。
　　 模型组、无比山药丸高、低剂量组和雷洛昔芬组与假手术组比较，表示骨吸收参数的TRS％显著升高;而与模型组比较，无比山药丸高、低剂量组和雷洛昔芬组的TRS％皆显著降低。
　　 1.3、无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨TFS％的影响。
　　 与假手术组比较，模型组、无比山药丸高、低剂量组和雷洛昔芬组大鼠胫骨TFS％明显升高;而无比山药丸高、低剂量组和雷洛昔芬组的TFS％均低于模型组。
　　 1.4、无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨MAR的影响。
　　 模型组、无比山药丸高、低剂量组和雷洛昔芬组大鼠胫骨MAR较假手术组明显升高;而与模型组相比，无比山药丸高、低剂量组和雷洛昔芬组的MAR均降低。
　　 1.5、无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨mAR的影响。
　　 与假手术组比较，模型组大鼠胫骨的mAR明显增高。无比山药丸高剂量组mAR与模型组相比明显降低;无比山药丸低剂量组mAR与模型组相比无显著性差异。与模型组比较，雷洛昔芬组mAR显著降低;与假手术组相比，雷洛昔芬组mAR无显著差异。
　　 1.6、无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨OSW的影响。
　　 模型组大鼠胫骨的OSW较假手术组明显增高。无比山药丸高、低剂量组OSW与模型组相比无显著性差异。雷洛昔芬组的OSW与模型组比较显著降低，与假手术组相比无显著差异。
　　 2、无比山药丸对去卵巢大鼠骨髓中OPN蛋白表达的影响
　　 模型组大鼠胫骨骨髓中OPN蛋白表达阳性面积显著高于假手术组。与模型组比较，无比山药丸高、低剂量组以及雷洛昔芬组的OPN蛋白表达阳性面积明显减少;而与假手术组比较，高、低剂量组明显增加，雷洛昔芬组无显著性差异。高剂量组的OPN蛋白表达阳性面积明显低于低剂量组。
　　 3、无比山药丸对去卵巢大鼠骨髓中ARβ2蛋白表达的影响。
　　 与假手术组比较，模型组大鼠胫骨骨髓中ARβ2蛋白表达阳性面积显著上调。无比山药丸高、低剂量组及雷洛昔芬组的ARβ2蛋白表达较模型组有明显下调;低剂量组的ARβ2蛋白表达较假手术组有显著上调，高剂量组与雷洛昔芬组与假手术组无显著性差异。
　　 与空白对照组比较，假手术组的上述指标均无显著性差异，从而排除了手术因素对实验的影响。
　　 结论：
　　 1、摘除大鼠卵巢15周后，作为衡量骨量主要标志的大鼠胫骨TBV％显著减少，而代表骨吸收参数的TRS％以及代表骨形成参数的TFS％、MAR、mAR和OSW均显著增加，表明卵巢切除所造成的是一种骨吸收大于骨形成的高转换型骨质疏松症。而除无比山药丸高、低剂量对OSW以及低剂量对mAR无明显影响外，该药的高、低剂量均能使上述指标在一定程度上发生逆转。说明无比山药丸能抑制骨的高转换，对去卵巢所致的骨质疏松症具有一定的预防作用。
　　 2、摘除大鼠卵巢15周后，大鼠胫骨骨髓中OPN和ARβ2蛋白表达均显著上调，表明OPN和ARβ2在骨质疏松发生过程中起着重要的作用;而无比山药丸能使它们的蛋白表达显著下调。这一结果提示，能够下调OPN和ARβ2的蛋白表达是无比山药丸对骨质疏松症产生预防作用的机理之一。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

文献综述 骨质疏松症的中医药治疗研究进展

前言

材料与方法

1 材料

1．1 动物

1．2 药物

1．3 主要试剂

1．4 主要仪器

2 方法

2．1 分组及处理

2．2 指标检测方法

2．3 统计学方法

结果

1 无比山药丸对去卵巢大鼠骨组织形态计量学指标的影响

1．1 无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨TBV％的影响

1．2 无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨TRS％的影响

1．3 无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨TFS％的影响

1．4 无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨MAR的影响

1．5 无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨mAR的影响

1．6 无比山药丸对去卵巢大鼠胫骨OSW的影响

2 无比山药丸对去卵巢大鼠骨髓中OPN蛋白表达的影响

3 无比山药丸对去卵巢大鼠骨髓中ARβ2蛋白表达的影响

讨论

1 中医“脾”、“肾”在骨质疏松症发生中的作用

2 无比山药丸对去卵巢大鼠骨组织形态计量学指标的作用

3 无比山药丸对OPN蛋白表达的调节作用

4 无比山药丸对ARβ2蛋白表达的调节作用

结论

参考文献

致谢

个人简历

附图