人IL-2Rα链基因NRE结合蛋白的初步分离纯化及其编码基因筛选

摘要

白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素2受体(IL-2R)的相互作用在调节淋巴细胞免疫反应中起着关键作用。为了更好地了解IL-2RαNRE特异结合蛋白(NRE-BP)的本质，研究人员分别对NRE-BP做了以下两方面的工作:一、应用肝素亲和层析对Jurkat细胞中IL-2RαNRE-BP进行初步分离纯化。结果发现NRE-BP存在于用0.3mol/LKCl的缓冲液H洗脱流出组分中，NRE-BP的结合比活性经肝素亲和层析后提高3倍;二、应用酵母单杂交系统从HeLa细胞MATCHAKERcDNA文库中筛选IL-2αNRE-BP的cDNA。1.双重报告基因菌株HL的建立:研究人员首次应用酵母单杂交系统，尝试从HeLa细胞cDNA文库筛选结合NRE-BP的cDNA。然后选择pHISi-1和pLacZi两种报告基因载体建立了双重报告基因菌株HL;2.阳性克的筛选及鉴定:利用HL菌株对HeLa细胞MATCHMAKERcDNA表达文库进行了三次筛选，从9.6×10<，6>个克隆中，筛得了76个His<'+>克隆，经双重筛选后，获得一个呈His<'+>LacZ<'+>克隆。

目录

英文缩写词表

前言

材料与方法

一、试剂与材料

二、主要实验方法

结果

第一部分IL-2RαNRE-BP的初步分离及纯化

第二部分IL-2RαNRE-BP编码基因的筛选

一、NRE三聚体的合成

二、将NRE三聚体插入报告基因载体上游

三、将带有NRE三聚体的报告基因质粒整合到酵母菌株YM4271基因组中

四、报告基因菌株的背景表达的测定

五、双重报告基因菌株的构建

六、Hela细胞MATCHMAKER cDNA文库的扩增

七、利用双重报告基因菌株对Hela细胞MATCHMAKER cDNA文库进行筛选

八、阳性克隆的鉴定

九、阳性克隆质粒的提取

十、酵母裂解物的制备

十一、H+L+酵母裂解物的DNA结合实验

十二、pH+L+质粒插入片段与细胞RNA的Slot blot

十三、pH+L+质粒插入片段与细胞RNA的Northern blot

十四、pH+L+质粒插入片段序列分析

讨论

小结

参考文献

综述 IL-2和IL-2受体的研究新进展

一、白细胞介素2（IL-2）

二、白细胞介素受体（IL-2R）

三、IL-2R介导的信号传递

四、结论

参考文献

致谢