变形链球菌重组表面蛋白AP人源单链抗体的筛选及其初步分离纯化

摘要

变形链球菌(S.mutans)C型是引起龋齿的主要致病菌,其表面蛋白PAc是致龋变链菌重要的毒力因子之一,在细菌对牙齿的初始黏附中起重要作用,具有良好的免疫原性,可诱导机体的保护性免疫应答.本研究用纯化的变形链球菌重组表面蛋白AP包被免疫试管对pDAN5噬菌体抗体库进行5轮亲和免疫筛选,第5轮筛选后洗脱下来的噬菌体与第一轮相比,富集了30倍.筛选得到13株噬菌体单链抗体,经ELISA检测OD450nm均在0.4以上.并对其中一株表达量较高的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,用IPTG诱导表达非融合性单链抗体,SDS-PAGE检测,其表达量为30﹪.表达的非融合性单链抗体复性后经Western-blotting杂交检测显示该非融合性单链抗体可与AP蛋白发生特异性抗原抗体反应,证明表达的非融合性单链抗体有生物活性。