与HSV-1感染相关的细胞立即早期基因产物HTRP在细胞辅抑制因子复合物中功能的分析

摘要

病毒在感染细胞的过程中,病毒能在不同的复制时相以不同的方式与宿主细胞的多种组分发生相互作用.正是这种多层次相互作用导致了病毒对细胞感染的不同病理学结果.病毒和细胞表面相应受体的结合起始了病毒与细胞之间的相互作用,这个结合过程可以和正常生理配体一样使受体活化,并激活相应的信号传导成分,使病毒所携带的特定信号传入胞内.在这一层次的研究,将使我们认识病毒感染过程中的第一个步骤在病毒与细胞相互作用领域中的具体机理和意义.单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)是一种具有较强传染性的病原体,它是一种结构复杂的双链DNA病毒,对于HSV-1病毒结合受体所导致的细胞早期基因产物功能的分析,不仅能加深对HSV-1和细胞之间相互作用的理解,也有助于阐明细胞中未知功能蛋白的作用方式及其分子机理.本研究的重点是分析HSV-1病毒感染KMB-17后诱导的差异基因htrp所编码蛋白HTRP(human transcription regulator protein)在细胞内的功能意义.我们以病毒学、分子生物学等实验为基础,结合酵母双杂交、报告基因等研究方法,对HTRP的功能特性和其作用蛋白进行了初步的研究.通过对htrp基因的Northern杂交分析发现htrp基因在脑、心脏、肝、肺、脾、肾组织中均有表达,但在心脏组织中为低水平表达,并证实了htrp基因的表达与HSV-1的刺激作用有密切的关联.通过对HTRP蛋白功能的初步研究,我们发现多项实验证据都提示HTRP具有转录抑制功能,因而可以推测HTRP作为HSV-1感染细胞后所产生的立即早期基因产物,有可能通过细胞辅抑制因子复合物调控了某些基因的转录,以便细胞对病毒的刺激产生适宜的应答.这些研究结果在一定程度上提示了一种病毒与细胞辅抑制因子复合物相互作用的新方式.

目录

摘要

Abstract

前言

材料和方法

一、材料

二、实验方法

(一)基本实验操作

(二)htrp基因Northern杂交分析

(三)HTRP蛋白功能初步研究

(四)利用酵母双杂交系统筛选HTRP的作用蛋白及相互作用的验证

(五)HTRP和其相互作用蛋白作用区域的β-半乳糖苷酶分析

(六)应用荧光素酶体内分析HTRP的功能

结果和分析

一htrp基因Northern杂交分析

一pEGFPN2-HTRP 和pEGFPN2-HTRP缺失体转染细胞包的荧光检测

一上调HTRP表达水平对细胞增殖和细胞凋亡的影响

一上调HTRP表达水平对HSV-1病毒繁殖的影响

一GSTpull-down 检测细胞内的HTRP相互作用蛋白

一利用酵母双杂交系统筛选HTRP的相互作用蛋白及相互作用的验证

一HTRP和SAP30相互作用区域的β-半乳糖苷酶分析

一应用荧光素酶体内分析HTRP的转录抑制功能

讨论

小结

参考文献

论文综述转录辅抑制因子复合物研究进展

参考文献

附录

致谢

研究生简历

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