胚胎干细胞向内皮细胞的分化及PECAM-1在胚胎干细胞分化过程中的表达规律研究

摘要

胚胎干细胞(embryonicstemcells，EScells)是一类具有自我更新和发育全能性的早期胚胎细胞，本研究通过诱导小鼠ES细胞体外分化，建立了ES细胞体外血管生成和血管新生的序惯性模型，为研究血管形成的体内过程与血管形成有关的基因功能，评价血管形成促进和抑制因子提供了一个有用的工具；同时研究了血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)在ES细胞的表达规律，探讨了PECAM-1在ES细胞分化过程中的作用。本文从以下方面进行了研究：　　一、(1)体外培养ES细胞诱导形成胚胎小体(embryoidbody，EB)，将11d的EB种植到胶原中诱发出芽性血管新生；通过免疫组织化学染色方法检测EB及其出芽向内皮细胞和功能血管的分化；(2)通过悬滴培养的方法，将培养6d的EB在全反式维甲酸(All-transretinoicacid，ATRA)的作用下向神经细胞诱导分化；(3)将培养11d的EB消化成单个细胞后，种植到甲基纤维素中，向造血细胞诱导分化。　　二、分体外培养ES细胞，保持其未分化状态，利用免疫组织化学、流式细胞术、RT-PCR等方法检测ES细胞未分化标志SSEA-1、碱性磷酸酶、Oct-4及PECAM-1的表达情况，同时，用流式细胞仪检测PECAM-1与其他内皮细胞标志表达的关系。　　三、通过对EB的整体免疫组织化学(whole-mountimmunostaining)和切片染色，探讨PECAM-1在EB中的表达分布及与其他内皮表面标志的表达关系。利用激光共聚焦显微镜观察PECAM-1在ES细胞的表达分布。　　四、除去白血病抑制因子(leukemiainhibitoryfactor,LIF)培养ES细胞，然后再次加入LIF培养，观察PECAM-1与ES细胞未分化标志SSEA-1，Nanog的表达的关系。

目录

论文说明：英文缩写

材 料

前 言

第一部分ES细胞的体外血管形成和向其它细胞的分化

前言

方法

结果

讨论

参考文献

第二部分PECAM-1的剪接体在ES细胞向内皮细胞分化过程中表达的研究

材料方法

结果

讨论

参考文献

第三部分PECAM-1在EB中的组织学表达模式

前言

材料方法

结果

讨论

参考文献

第四部分PECAM-1在保持ES细胞全能性中的作用

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结 论

综述（1）胚胎干细胞的自我更新

综述（2）血管形成的研究模型

在学期间发表的论文

致谢