阿维A对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞功能影响的研究

摘要

系统性硬皮病(SSc)是以过量胶原在皮肤、肺、消化道等内脏器官沉积为特征的结缔组织疾病，引起皮肤和内脏器官纤维化。近年来临床研究表明，阿维A治疗SSc具有较好疗效，但其作用机制尚未完全清楚。本课题重点研究了第二代单芳香维A酸一阿维A对SSc患者皮肤成纤维细胞(Fb)增殖、胶原合成、Ⅰ型前胶原基因转录、细胞因子TGF-β1分泌的影响，从细胞和分子水平探讨阿维A可能的作用机制。 第一章阿维A对SScFb增殖的影响 目的：观察阿维A对SScFb形态及增殖的影响。方法：1.建立SSc患者Fb原代培养细胞三株。2.倒置显微镜观察10-8～10-5mol/L阿维A作用48h后对SScFb形态的影响。3.MTT法分析对SScFb增殖的影响。结果：1.实验所用浓度的阿维A对SScFb形态无明显影响。2.10-7～10-5mol/L阿维A可显著抑制SScFb增殖(P＜0.05)，显示浓度依赖性特征。结论：1.实验所用不同浓度的阿维A对SScFb形态无明显影响。2.阿维A可显著抑制SScFb增殖。 第二章阿维A对SScFb胶原合成及Ⅰ型前胶原基因表达的影响 目的：研究阿维A对SScFb胶原蛋白合成及Ⅰ型前胶原基因表达的影响。方法：1.培养的SScFb加入10-8～10-5mol/L阿维A48h后，酶标仪测定细胞培养上清液中羟脯氨酸含量，折算成胶原蛋白含量。2.培养的SScFb加入上述各浓度的阿维A24h后，用BiospinRNASimplyP试剂盒提取细胞总RNA，RT-PCR方法测定Ⅰ型前胶原mRNA的表达。结果：1.阿维A能抑制SScFb胶原合成，呈浓度依赖性关系。10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L阿维A均可显著抑制胶原合成(P＜0.05)。2.10-5、10-6mol/L阿维A可使SScFbⅠ型前胶原mRNA表达明显减少(P＜0.05)。结论：阿维A可通过抑制SScFbⅠ型前胶原基因表达减少胶原合成。 第三章阿维A对SScFb分泌TGF-β1的影响 目的：研究阿维A对SScFb分泌细胞因子TGF-β1的影响。方法：培养的SScFb加入10-8～10-5mol/L阿维A48h后，ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1含量。结果：阿维A呈浓度依赖性抑制TGF-β1的分泌，10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L阿维A可显著减少SScFb分泌TGF-β1(P＜0.01)。结论：TGF-β1为促进胶原合成的主要细胞因子，阿维A可通过抑制SScFb自分泌TGF-β1这一间接途径抑制其胶原蛋白合成。

目录

缩略语

全文摘要

前言

第一章阿维A对硬皮病成纤维细胞形态及增殖的影响

第二章阿维A对硬皮病成纤维细胞胶原合成及Ⅰ型前胶原基因表达的影响

第三章阿维A对硬皮病成纤维细胞分泌TGF-β1的影响

总结

综述与系统性硬皮病相关的细胞因子

综述维A酸对成纤维细胞功能的影响及其受体表达

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