生殖器疱疹病毒体外对阿昔洛韦、伐昔洛韦的药敏测定以及空斑法提取阿昔洛韦耐药株

摘要

HSV是引起单纯疱疹和生殖器疱疹的主要病原体。近年来，许多国家流行病学调查结果显示，生殖器疱疹的发病率呈逐年上升趋势。而且由于性行为方式的改变，由HSV-1引起的生殖器疱疹的比率也逐年增加。随着核苷类抗病毒药的广泛使用和器官移植技术的成熟，以及HIV发病率的增加，国外关于HSV对抗疱疹病毒药的敏感性降低甚至出现耐药株的报道逐渐增多。HSV耐药株首先从免疫功能减弱的感染者分离到。核苷类抗疱疹病毒药是应用最广泛的一类，阿昔洛韦[9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤]是其代表药物。目前关于HSV耐药株存在两种分歧，部分学者认为长期使用抗疱疹病毒药物会导致病毒生存压力而引起耐药，而另一部分学者则持相反意见，认为在抗疱疹病毒使用二十多年后的大规模调查中，并未发现病毒的药物敏感性有明显上升趋势。关于HSV的药物敏感性研究国内相对较少。因此，我们对目前南京地区部分HSV临床株进行了阿昔洛韦和盐酸伐昔洛韦的药物敏感性测定，并进一步在体外用药物诱导及空斑纯化的方法提取药物不敏感株，以初步了解该地区流行株的药敏程度并建立体外药物诱导，空斑纯化筛选HSV耐药株的方法。 一、对2005年5月至2005年11月在我所性病门诊就诊的50例生殖器疱疹患者标本用细胞培养的方法分离HSV临床毒株，并进行荧光单克隆抗体分型。总共收集病例50例，男40例，女10例。细胞培养阳性27例，分离率54％，直接免疫荧光分型全部为HSV-2型感染。本次发病用过核苷类抗病毒药15例，细胞培养阳性10例(66.67％)，未用过核苷类抗病毒药35例，培养阳性17例(48.57％)，x2检验P＞0.05，用药组与未用药组培养阳性率无显著性差异。对21株病毒毒力测定结果显示：水疱、脓疱期病毒毒力高于溃疡、糜烂、结痂期。 二、用MTT法测定标准株及15株Ⅱ型HSV对阿昔洛韦(ACV)，伐昔洛韦(VCV)的半数病毒抑制浓度(IC50)，并分析其中初发组与复发组，用药组与未用药组在药物敏感性上有无差异。15株临床毒株对ACV、VCV均高度敏感。ACV的IC50在0.0215～0.2799μg/ml之间(平均0.0766μg/ml)，VCV的IC50在0.0549～0.4575μg/ml之间(平均0.1605μg/ml)。扩增出的15例HSV-2型病毒中，初发8例，平均年龄35.8岁，其中男性6例，女性2例；复发7例，平均年龄36岁，全部为男性。用过核苷类抗病毒药6例，均为复发，最后一次服药距来诊间隔1天～3月。未用药9例，其中1例为第二次发病，因前次自愈未用药。初发组ACV和VCV的IC50分别为0.258～0.950μg/ml(平均0.0489μg/ml)，0.0701～0.1866μg/ml(平均0.1191μg/ml)；复发组ACV和VCV的IC50分别为0.0215～0.2799μg/ml(平均0.0954μg/ml)，0.0549～0.4575μg/ml(平均0.1940μg/ml)；用药组ACV和VCV的IC50分别为0.0215～0.2799μg/ml(平均0.0954μg/ml)，0.0549～0.4575μg/ml(平均0.1639μg/ml)；未用药组ACV和VCV的IC50分别为0.258～0.960μg/ml(平均0.0541μg/ml)，0.0701～0.3750μg/ml(平均0.1476μg/ml)。数据采用Wilcoxon秩和检验，P值均＞0.05，初发与复发组，用药与未用药组对ACV，VCV的敏感性均无显著差异。 三、临床株及实验室标准株用MTT法进行ACV敏测定。将HSV实验室标准株与临床株依次置于含2μg/ml、5μg/mlACV的半固体培养液中培养，提取空斑，扩增后MTT法测定其对ACV的药物敏感性。HSV-1Sam标准株ACV的IC50为0.0336μg/ml;HSV-2333株ACV的IC50为0.0616μg/ml。从HSV-1Sam标准株中提取到1个耐药空斑；从HSV-2333标准株中提取到11个耐药空斑，扩增出9株；从15株临床株中未提取到耐药空斑。从HSV-1Sam株提取的空斑对ACV的IC50为13.359μg/ml;从HSV-2333株提取扩增出的9个耐药空斑对ACV的IC50分别为5.084μg/ml，4.84μg/ml，4.71μg/ml，3.96μg/ml，3.20μg/ml，3.17μg/ml，3.02μg/ml，2.65μg/ml,1.04μg/ml。

目录

缩略语

前言

全文摘要

实验路线图

第一部分生殖器疱疹临床标本培养及病毒毒力测定

第二部分15株Ⅱ型单纯疱疹病毒临床分离株体外对阿昔洛韦、伐昔洛韦的敏感性测定

第三部分体外经阿昔洛韦诱导、空斑纯化的HSV对阿昔洛韦的敏感性测定

第四部分课题小结、附表及相关综述

致谢