参松养心胶囊抗心律失常机理研究

摘要

心律失常是临床上常见且又对患者的生活质量和生命安全影响极大的心血管疾病。从90年代CAST和CASTII试验结果公布以来，人们开始重视抗心律失常药物治疗的收益与风险评估。参松养心胶囊(SSYX)是一种复方制剂，方中多数药物均有较好的抗心律失常作用。动物实验证明，SSYX可以明显抑制药物诱发的心律失常；随机临床验显示，SSYX对治疗冠心病心律失常有明显疗效。关于SSYX抗心律失常的机制和对心肌细胞离子通道的影响至今未见报道。 目的：观察SSYX干粉提取溶液对单个心室肌细胞L型钙电流(I<,Ca,L>)，钠电流(I<,Na>)，瞬时外向钾电流(I<,to>)，内向整流钾电流(I<,K1>)，延迟整流钾电流慢成分(I<,Ks>)的影响，以及对在HEK293细胞表达hERG通道电流(I<,Kr>)的影响。探讨SSYX在离子通道水平的抗心律失常作用机制。 方法：急性分离豚鼠和大鼠心脏，用Langendoff灌流系统离体灌流，联合使用胶原酶Ⅱ和蛋白酶E，分离获得单个的心室肌细胞。培养HEK293细胞，用脂质体瞬时转染pcDNA3.1-hERG和pEGFP-C1质粒，于转染后24～48h在荧光显微镜下，对有绿色荧光表达的细胞进行电生理记录。用标准的全细胞膜片钳记录技术，记录豚鼠心室肌细胞的I<,Ca,L>，I<,Na>，I<,K>电流，大鼠心室肌细胞的I<,to>和I<,K1>电流，以及转基因阳性HEK293细胞的I<,Kr>电流。观察SSYX干粉提取溶液对各种离子通道电流的影响。 结果：通过酶解法得到的豚鼠和大鼠心室肌细胞能够记录到动作电位和各种离子通道电流，表明其具有良好的细胞电生理特性。大约40％～60％瞬时转染后HEK293细胞表达绿色荧光蛋白，同时可记录到I<,Kr>通道电流，表明细胞模型构建成功。文中介绍了SSYX对动作电位的影响、SSYX对I<,Ca,L>通道的影响、SSYX对I<,Na>通道的影响、SSYX对I<,to>通道的影响、SSYX对I<,K1>通道的影响、SSYX对I<,Ks>通道的影响，以及SSYX对I<,Kr>通道的影响。 结论：参松养心胶囊干粉提取溶液对I<,Ca>,L、I<,Na>、I<,to>、I<,Ks>和I<,K1>多种心室肌离子通道均具有不同程度的阻滞作用。SSYX可以抑制豚鼠心室肌细胞I<,Ca>,L的峰值电流，使通道的时间依赖性激活和失活减慢，并促进通道的电压依赖性失活，使稳态失活曲线的V<,1/2>左移。SSYx可以抑制豚鼠心室肌细胞I<,Na>的峰值电流，并使通道的稳态激活曲线右移。SSYX可以抑制大鼠心室肌细胞I<,to>峰值电流，加速通道时间依赖性失活，并促进通道的电压依赖性失活。SSYX可以抑制大鼠心室肌细胞I<,K1>的内向成分。SSYX可以抑制豚鼠心室肌细胞I<,K>电流，主要是作用于其慢激活成分I<,Ks>。SSYX对hERG通道的电流幅度，通道失活速度及通道失活后恢复速度无显著影响。 SSYX对这些通道的综合作用可使得心肌细胞的除极幅度降低，动作电位时程和有效不应期延长，这可能是其产生抗心律失常作用的机制。同时这种多通道阻滞作用可能降低药物引发心律失常的风险，参松养心胶囊可能有广谱的抗心律失常作用。

目录

论文说明:缩略语表

前言

材料与方法

1药品和试剂

2溶液配制

3实验器材

4心肌细胞分离

5质粒的扩增与提取

6细胞培养与转染

6全细胞膜片钳记录

7各种通道电流的记录方法及刺激参数设置

8数据分析

9统计方法

结果

1心肌细胞的动作电位

2通道电流的衰减效应

3SSYX对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用

4SSYX对豚鼠心室肌细胞钠通道的作用

5. SSYX对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道的作用

6.SSYX对大鼠心室肌细胞内向整流钾通道的作用

7.SSYX对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾通道的作用

8SSYX对转染HEK293细胞HERG通道的作用

讨论

结论

参考文献

综述：心肌细胞离子通道与抗心律失常药物

个人简历

在校期间发表论文和参加学术活动

致谢