SIVmac251不同途径感染中国恒河猴的实验研究

摘要

性传播(黏膜途径)是艾滋病的主要传播途径之一，建立粘膜感染动物模型具有非常重要的意义。目前，国内缺乏对静脉和粘膜感染的对比性研究，本实验用SIVmac251经静脉、阴道和直肠三种途径感染恒河猴，对SIV的感染情况、不同感染途径是否对临床表现、病毒学指标及基因变异上存在影响以及影响程度等问题进行了实验研究。 SIVmac251通过静脉、阴道和直肠三种途径各感染恒河猴1只，通过对病毒分离、血浆病毒载量、PBMC中前病毒DNA检测、CD4<'+>/CD8<'+>比值等一系列指标的测定，表明三种途径均成功感染实验猴，同时建立了黏膜感染动物模型。 临床发现实验猴在感染后14天出现食欲减退，并持续两周左右，体重有所下降，腹股沟等处浅表淋巴结肿大。静脉感染猴S153感染后半年时，食欲减退，体重下降，腹泻，腹股沟淋巴结变小，六个半月时死亡。用SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法检测病毒，各途径感染病毒血症出现时间有先后差别，分别为：静脉3d、直肠7d和阴道10d，没有观察到高峰期延迟现象，都是在14d达到高峰，以后迅速下降。用病毒分离的方法，两只粘膜感染猴S142和S172较静脉感染猴S153有高峰期延长现象。 抗体检测结果显示，静脉感染猴在感染后10d时抗体转为阳性，整个感染过程中抗体水平都很低，最高滴度为1：80；两只黏膜感染猴在14d时抗体转为阳性，整个实验期抗体水平一直比较高，阴道感染猴S142最高到1：5120，直肠感染猴S172最高到1：2560。 同时发现，在42w时两只黏膜感染猴组织中病毒载量很高，阴道感染猴1.118E+08，直肠感染猴1.288E+07；淋巴结病理切片显示，处于病程进展期；这时血浆中病毒载量却很低，阴道感染猴4.322E+03，直肠感染猴为阴性。 CD4<'+>/CD8<'+>比值和CD4<'+>细胞数变化趋势基本一致，在28d时CD4<'+>/CD8<'+>比值倒置。 nef和env vlv2两段基因在病毒感染急性期中基因变异研究，从测序结果看，三种途径感染后在env段没有表现出很大的差别；血浆中nefRNA和DNA的变异情况都表现出了不同途径上的差异，三种途径nefRNA均在两个位点发生稳定的突变，静脉感染猴在nefDNA中却没有稳定突变的产生。阴道感染猴S142和直肠感染猴S172 nef DNA和RNA分别在很多位点都发生了突变，这些位点并不相同。 SIV不同途径成功感染中国恒河猴和SIV不同途径感染后的实验研究，对于更好的认识艾滋病，解读发病机制，对于疫苗设计及评价，都具有非常重要的理论及现实意义。由于条件有限，本实验共感染恒河猴3只，每种途径1只，所得实验数据不能排除个体差异和一些别的因素所带来的影响，结果仅对不同途径感染进行初步探索性研究，有待于进一步更为详尽的研究。

目录

论文说明：Abbreviations

摘要

第一部分前言

第二部分SIVmac251不同途径感染恒河猴的实验研究

第一节引言

第二节材料与方法

第三节结果

1.临床表现

2.病毒分离结果

3.PBMC中前病毒DNA检测结果

4.血浆病毒载量的检测

5.CD4+/CD8+比值

6.CD4+绝对数

7.抗体检测结果

8.淋巴结活检后组织中病毒载量

9.病理切片结果

第四节讨论

第三部分SIVmac251不同途径感染中国恒河猴基因变异研究

第一节引言

第二节材料与方法

第三节结果

第四节讨论

第四部分结论

参考文献

发表论文及参加会议

致谢