脐带血细胞移植修复消化道粘膜及内镜检查医源性损伤机制的基础研究

摘要

一、目前，临床缺乏治疗炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)的有效手段。脐血是目前最理想、方便的干细胞移植的供体来源之一。本文在免疫活性细胞移植诱导SCID鼠结肠炎模型上，移植脐血单个核细胞(CBMNS)后观察病变肠道的变化，在此基础上尝试探讨干细胞移植治疗IBD的作用机制。同时对收集到的近十余年接受手术治疗IBD患者肠道标本进行了回顾性研究。 经组化染色发现，IBD患者病变肠道粘膜内大量炎症细胞浸润的同时调节性T细胞(Treg)比例相对降低。SCID鼠在移植BALB/C鼠CD4+CD25-T细胞后3-5w表现出明显消耗性症状，肠道病理改变类似人类疾病的变化。移植CM-DiI荧光标记后的hCBMNS对模型鼠疾病活动指数(DAI)的观察发现移植组一般状况改善，移植5w后肠道病理检测显示组织学评分降低，荧光示踪发现移植细胞分布于肠粘膜淋巴组织内和腺上皮细胞间，提示其可能参与了结肠道粘膜的修复过程。进一步的体外研究表明，间充质干细胞(MSC)能有效抑制小鼠淋巴细胞的活化增殖，提示免疫调节作用可能是其治疗作用的重要机制之一。 上述研究结果提示，IBD患者肠粘膜内的确存在Treg相对不足的现象。实验数据表明移植CBMNS可能改善IBD肠道病变，MSC可能在其中起到一定的治疗作用。 二、SCID鼠色素内镜(染色内镜，chromoendoscopy)检查，需要借助活体染色剂提高对粘膜早期病变的检出率，但作为一种新兴技术，由于其开展较晚，对于其医源性损伤(iatrogenic)的研究十分少见。虽然一般认为在临床染色所用浓度的活体染色剂对机体的影响不大，但弄清其对机体细胞究竟存在损伤与否是临床上亟待回答、也是不能回避的问题。 采用临床常用的内镜活体染料美蓝(MB，Methylene blue)和靛胭脂(IC，indigo carmine)对待测的细胞染色，探讨经冷光源照射后的细胞DNA损伤情况，并尝试明确其损伤的发生机制和作用规律。应用单细胞凝胶电泳技术(comet assay)检测经冷光源照射后的待测染色细胞，用CASP软件分析DNA损伤情况。结果显示经光照后胃癌细胞系SGC7901 MB组细胞DNA损伤程度明显高于不照射组、IC照射或不照射组和对照的未经染色单纯照射组，在原代培养的干细胞和原代细胞上也得到类似结果。进一步研究表明该损伤严重程度与光照时间相关，光照停止后相应损伤得到一定程度修复。运用Annexin V-FITC/PI双染法经流式细胞仪(FACS)观察发现这一过程伴随有细胞凋亡现象。选用荧光探针DCFH-DA进行细胞内活性氧(ROS，Reactive Oxygenspecies)检测，发现染色组经照射后细胞内ROS显著升高。对管家基因进行PCR未发现DNA损伤位点分布差异。 研究结果表明：MB确实造成被染色细胞的DNA损伤，并可以诱发细胞凋亡，其作用机制与光化学反应激发产生的过量ROS有关。由于在癌前病变组织中DNA损伤与基因突变和恶变关系十分紧密，因此应尽量减少对特定人群的MB染色检查以防止造成进一步的医源性DNA损伤。该项研究结果提示，某些活体染料确实存在造成被染色细胞损伤的可能性。对临床使用的其它活体染色剂需要进一步研究以评估其潜在风险。

目录

论文说明：常见英文缩写

序言

第一部分人脐带血单个核细胞移植对炎症性肠病模型鼠治疗作用的实验研究

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分色素内镜使用染色剂美蓝对胃粘膜细胞DNA损伤的研究

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述1消化内镜检查中使用染色剂的安全性问题

综述2肠道共生菌与消化道粘膜

综述3乙型肝炎病毒超感染对HIV基因表达的影响

综述4国人Cronkhite-Canda综合征20年回顾

在读期间发表论文

致谢