SARS相关冠状病毒B细胞组合抗原表位多肽的研究

摘要

严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)是本世纪初出现的严重传染性疾病，该疾病的高传染性和高死亡率使它成为一种对全球公共健康的威胁。SARS是由冠状病毒家族新成员SARS相关冠状病毒(SARS associated coronavirus，SARS-Cov)感染引起的。SARS爆发以前，人类的血清中从未发现抗SARS-Cov的抗体，说明这种病毒是第一次感染人类。SARS-Cov作为一种新的冠状病毒，其毒力远远超过其他己知的家族成员，目前尚无有效治疗SARS的抗病毒药物。人们普遍认为，研制一种安全有效的疫苗是阻止SARS再次流行最有效的方式，而表位疫苗则被认为是较理想的候选疫苗之一。 本课题组在前期研究中，利用合成的包含SARS-Cov主要结构蛋白的重叠肽库进行表位作图筛选，共筛选到了5条对恢复期SARS病人呈血清高交叉反应性的线性B细胞表位。本研究将上述5条线性B细胞表位进行不同组合，并用柔性连接子(G<,4>S)<,3>进行连接，通过搭桥PCR方法和人工合成DNA方法获得了5个多表位肽(PEP，poly-epitope peptide)编码基因片段，然后构建原核表达载体进行原核表达。原核表达的重组多表位肽(rPEP，recombinant poly-epitope peptide)rPEP1和rPEP2与恢复期SARS病人抗SARS-Cov阳性血清进行交叉反应性检测，结果证明，rPEP1和rPEP2都具有广泛的交叉反应性。重组多表位肽rPEP1和rPEP2免疫兔子制备多克隆抗体，利用ELISA方法和Western Blotting方法对多抗进行鉴定，结果表明，rPEP1和rPEP2都具有较强的免疫原性。本研究获得了具有广泛交叉反应性和较强免疫原性的重组多表位肽rPEP1和rPEP2，从而为制备SARS表位疫苗奠定了基础。

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综述SARS疫苗研究进展

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