三种核苷类逆转录酶抑制剂对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化及分泌脂肪因子的影响

摘要

目的：1、研究司他夫定(D4T)、齐多夫定(AZT)和去羟肌苷(DDI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。 2、观察D4T、AZT和DDI对处于增殖和分化过程中的3T3-L1前脂肪细胞分泌胰岛素样生长因子-1(IGF-1)，以及成熟脂肪细胞分泌脂联素(APN)的影响。 通过上述研究，探讨HIV/AIDS患者接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后出现脂肪萎缩的发生机制。 方法：1、将不同浓度的D4T、AZT和DDI(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)作用于CFSE标记的3T3-L1前脂肪细胞，应用流式细胞仪测定细胞增殖情况。 2、选择D4T(1μg/ml、4μg/ml)、AZT(0.1μg/ml、1μg/ml)或DDI(1μg/ml、10μg/ml)作用于3T3-L1前脂肪细胞，使用MTT比色法测定细胞增殖情况。 3、将不同浓度的D4T、AZT和DDI(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)作用于3T3-L1前脂肪细胞，诱导分化至第8天，使用油红0脂肪染色法观察细胞分化情况。 4、收集3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化过程中的培养上清液，应用ELISA方法测定APN和IGF-1水平。 结果：1、流式细胞仪CFSE标记法检测结果显示，与对照组相比，不同浓度D4T干预组(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的增殖指数降低程度分别为19.1％、39.8％和50.8％；AZT干预组(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的降低程度分别为6.7％、18.1％和30.9％。MTT比色法也证实D4T和AZT能够减弱3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力。 2、高浓度D4T(10μg/ml)和AZT(10μg/ml)能够抑制3T3-L1前脂肪细胞分化能力，造成成熟脂肪细胞数量减少。 3、ELISA检测结果发现，在细胞增殖过程中，与对照组相比，不同浓度D4T干预组(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)中的IGF-1含量下降程度分别为21.5％、31.7％和48.7％；D4T还能降低分化第8天的成熟脂肪细胞分泌IGF-1的能力，呈浓度依赖性，下降程度分别为10.5％、30.7％和42.6％；而AZT(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)仅能降低增殖过程中前脂肪细胞分泌IGF-1的能力，与对照组相比下降程度分别为8.6％、21.7％和29.5％。 4、与对照组相比，在10μg/ml的D4T干预组和AZT干预组中，成熟脂肪细胞分泌的APN水平下降。 5、DDI对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化和IGF-1、APN的分泌未见明显影响。 结论：1、本研究首次发现D4T能够降低3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力，为浓度依赖性；同时证实AZT能够降低3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力。 2、本研究证实了D4T和AZT能够抑制3T3-L1前脂肪细胞分化能力，使成熟脂肪细胞数量下降。 3、本研究首次在体外实验中发现，D4T和AZT均能够减弱增殖过程中的前脂肪细胞分泌IGF-1的能力，呈浓度依赖性；D4T还能够减弱成熟脂肪细胞分泌IGF-1的能力。 4、本研究证实了D4T和AZT能够使成熟脂肪细胞分泌的APN含量下降。 由此，D4T和AZT可能通过影响前脂肪细胞的增殖、分化及脂肪因子分泌等途径，导致脂肪萎缩的出现。

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讨论

结论

参考文献

HIV相关脂肪萎缩的发病机制

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