环磷酰胺和Etanercept在野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压模型中的应用及其相关机制的初步探讨

摘要

背景： 肺动脉高压(PAH)是一组病因复杂的疾病，目前具体的发病机制仍不清楚。尤其是结缔组织病(CTD)相关PAH，在临床上仍然是治疗的难点，预后较差。动物模型对疾病的研究必不可少，一个能够很好模拟CTD相关PAH的动物模型，将对进一步研究其发病机制以及探索新的治疗方法提供极大的帮助。在现有的PAH动物模型中，野百合碱(MCT)诱导的大鼠PAH模型中炎症反应在PAH形成过程中扮演着重要角色，因此可能是最接近CTD相关PAH发病机制的模型。在该模型中探索控制炎症反应和免疫反应药物的应用以及探讨其相关作用机制，将对建立CTD相关PAH的动物模型以及新的治疗方法的应用提供理论依据和广阔的前景。 目的： 1.建立MCT诱导大鼠PAH的动物模型。 2.利用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白(Etanercept，ECP)和环磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX)对该模型进行预防干预和治疗干预，并通过测量平均肺动脉压(mPAP)与模型组进行比较来判断干预是否有效。 3.通过测量了大鼠血清和肺组织中前炎症因子TNF-α、IL-1α和IL-6的表达水平，来评价炎症反应在该模型的PAH形成过程中的作用，再结合药物干预实验的结果，对其相关作用机制做出推断。 方法： 1.大鼠一次性腹腔注射MCT60mg/kg，分别于2周末和4周末利用右心导管技术测量平均肺动脉压(mPAP)，与正常对照组比较，判断模型建立是否成功。 2.将CTX和ECP分为预防组(给予MCT的同时给药)和治疗组(给予MCT两周后给药)进行干预，分别在两周末和四周末，利用右心导管技术测量mPAP，与模型组比较判断干预是否有效。用辛伐他汀(SVT)作为预防组的阳性对照。同时，取肺组织病理进行H.E.染色并对管腔狭窄程度(R值)进行分析，来辅助mPAP的判断。 3.利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中的TNF-α、IL-1α和IL-6，用免疫组化染色法检测大鼠肺组织中TNF-α和IL-6的表达。 结果： 1.大鼠一次性腹腔注射60mg/kg的MCT后2周肺动脉压力即出现升高(与正常对照组相比差异有统计学意义，P<0.01)，4周时肺动脉压力更是显著升高。 2.ECP预防干预能显著降低肺动脉压力(2周后与模型组相比，mPAP差异有统计学意义，P<0.01)；CTX治疗干预能显著降低肺动脉压力(与4周模型组相比，mPAP差异有统计学意义，P<0.01)。 3.各组大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1α和IL-6的水平无明显升高。 4.该模型大鼠肺组织病理的镜下表现为：肺泡间隔明显增宽，见巨噬细胞及淋巴细胞浸润；细支气管旁的小动脉管壁增厚明显，内皮细胞肿胀；有些大鼠出现明显肺水肿。 5.对大鼠肺组织中小动脉管腔狭窄程度(R值)进行分析显示，管腔狭窄程度越高，mPAP越高。通过mPAP判断干预有效的组别，通过R值统计分析也得到了相同的结果。 6.免疫组化染色显示，TNF-α和IL-6在模型组和各干预组大鼠的肺组织中均有表达，棕黄色颗粒染色均主要分布于肺泡间隔中的巨噬细胞胞浆中。 结论： 1.大鼠一次性腹腔注射60mg/kg野百合碱可以成功的建立起肺动脉高压模型。 2.ECP预防干预有效，CTX治疗干预有效。 3.ECP干预有效可能是通过封闭TNF-α受体，抑制肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6等前炎症因子，从而抑制单核巨噬系统的活化，减轻炎症细胞对肺泡间隔和血管壁的浸润及肺泡间隔和血管壁的增厚，最终阻止大鼠肺动脉压力的升高。 4.CTX干预有效一方面可能是通过抑制免疫细胞(例如巨噬细胞、淋巴细胞)而减轻炎症反应和免疫反应，另一方面可通过抑制肺小血管内皮损伤后的增殖，减轻管腔狭窄的程度，最终阻止大鼠肺动脉压力的升高。

目录

论文说明:英文缩写表

前言

第一部分野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型的建立、药物干预及模型评价

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分环磷酰胺和Etanacept在该肺动脉高压模型中的应用效果评价

材料和方法

结果

讨论

小结

第三部分环磷酰胺和Etanacept在该肺动脉高压模型中干预有效的作用机制的初步探讨

材料与方法

结果

讨论

小结

结论

展望

参考文献

致谢

综述Ⅰ结缔组织疾病相关肺动脉高压动物模型的研究进展

综述Ⅱ肿瘤坏死因子-α拮抗剂用于结缔组织病相关肺动脉高压的治疗