S100P在结直肠癌中异常表达的临床意义及其调控机制

摘要

研究背景: 结直肠癌是世界范围内常见的恶性肿瘤，在我国结直肠癌居癌症致死因素的第四位。尽管近年来手术方式和辅助治疗手段不断发展，结直肠癌患者的生存率仍旧不理想。深入研究结直肠癌的分子机制，寻找理想的用于早期诊断或判断预后的结直肠癌肿瘤标志物，具有重要的临床意义。近年来关于S100P在肿瘤组织中的异常表达逐渐受到重视，其在多种肿瘤中均有异常表达，且与肿瘤的生长、浸润及转移密切相关，对部分肿瘤的诊断分型及预后判断均有一定价值。但是，S100P在结直肠癌中高表达的临床价值尚未明确。 研究目的: 明确S100P在结直肠癌组织中高表达的临床意义，探讨调控S100P基因表达的表观遗传学机制。研究结直肠癌患者血清S100P水平是否增高及其临床价值。 实验方法: 选取本院自2003年7月至2006年7月手术切除的96例散发性结直肠癌及配对正常结直肠组织标本与其中76例患者的术前血清标本。统计所有患者的临床病理资料，并进行为期30～65个月的术后随访。 采用免疫印迹法和实时定量逆转录PCR的方法检测S100P蛋白和mRNA在结直肠癌组织与正常对照组织以及结直肠癌细胞系中的表达。并与患者的临床病理资料和预后相关资料进行统计分析。 通过对基因组经亚硫酸氢盐修饰后直接测序的方法明确S100P基因启动子区甲基化与基因表达的相关性。建立荧光实时定量甲基化特异性PCR的方法检测结直肠癌组织与正常对照组织以及结直肠癌细胞系中S100P基因启动子区甲基化状态，并与S100P基因的表达和患者临床资料进行相关分析。 通过ELISA方法检测结直肠癌患者及健康正常人血清S100P水平，并结合患者临床病理资料与预后相关资料评价结直肠癌患者术前血清S100P测定的诊断价值和预后价值。 实验结果: 96例散发性结直肠癌患者中男性61例，女性35例，平均年龄62.4±1.2岁；右半结肠癌29例，左半结肠癌17例，直肠癌50例。S100P蛋白在结直肠癌组织中表达的阳性率为63.0％(51/81)，显著高于正常对照组织(4.9％，P=8.13×10-15)；S100PmRNA在结直肠癌组织中的表达也显著高于配对的正常对照组织(P=0.005)。通过对基因组经亚硫酸氢盐修饰后直接测序的方法检测S100P基因启动子区甲基化状态在结直肠癌肿瘤细胞系和组织中与S100PmRNA的表达显著相关(P值分别为0.002；0.039)。通过荧光实时定量甲基化特异性PCR的方法检测S100P基因启动子区甲基化状态在结直肠癌肿瘤细胞系和组织中与S100PmRNA的表达也有显著的相关性(P值分别为0.001；5.0×10-6)。 结直肠癌组织中S100P蛋白的表达与肿瘤的原发部位显著相关(P=0.008)，从右半结肠、左半结肠至直肠，S100P蛋白的阳性率分别为42.3％、61.5％、76.2％。S100P蛋白的表达与结直肠的临床分期无显著性相关(P=0.524)。S100PmRNA在结直肠癌中的表达与肿瘤的原发部位、临床分期等临床特征并无显著的相关性。S100P基因启动子区去甲基化状态的定量值在直肠癌显著高于结肠癌(P=0.007)，且其随着结直肠癌分化程度的减低有逐渐减低的趋势(P=0.098)。在Ⅰ～Ⅲ期的结直肠癌患者中，组织S100P阴性患者的预后有优于组织S100P阳性患者的趋势(P=0.056)。 结直肠癌患者术前血清S100P水平显著高于正常人(P=7.4×10-9)。血清S100P诊断结直肠癌的敏感度为38.2％，相对于正常人的特异度为91.9％，联合血清CEA检测在结直肠癌患者中的阳性率可达64.4％。结直肠癌患者血清S100P水平有随肿瘤分期逐渐升高的趋势(P=0.050)，其阳性率分别为Ⅰ期25.0％、Ⅱ期30.8％、Ⅲ期44.4％、Ⅳ期54.5％。术前血清S100P水平是结直肠癌患者长期生存的独立影响因素(P=0.023)。术前血清S100P阳性的结直肠癌患者的5年生存率为52.3％，而术前血清S100P阴性患者的5年生存率为81.4％(P=0.005)。在调整了临床分期的影响后，术前血清S100P升高的结直肠癌患者死亡的风险是血清S100P正常者的3.6倍。 实验结论: S100P蛋白与mRNA在结直肠癌组织中的表达显著高于配对的正常结直肠组织，S100P蛋白的表达与肿瘤的原发部位显著相关，并与患者的生存时间呈负相关趋势。S100P基因启动子区的甲基化状态与基因表达密切相关，可能在一定程度上参与调控了S100P基因的表达。结直肠癌患者术前血清S100P水平显著高于健康正常人群，并与生存时间显著相关，其水平升高提示患者预后不良。与血清CEA联合检测可提高诊断结直肠癌的敏感性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

前言

第一部分S100P基因在结直肠癌组织和细胞系中的表达及其调控机制的探讨

实验材料

实验方法

实验结果

第二部分结直肠癌组织中S100P基因表达与甲基化状态的临床意义

实验材料与实验方法

实验结果

第三部分结直肠癌患者血清S100P水平的测定及其临床意义

实验材料与实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

附表

综述 S100P与肿瘤─一个新的肿瘤标记物？

致谢

个人简历