含碘造影剂致人肾小管上皮细胞的损伤作用及牛磺酸干预研究

摘要

第一部分：
　　 目的:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HK—2)为模型，比较高渗、低渗、等渗含碘造影剂泛影葡胺、碘海醇和碘克沙醇的细胞毒作用。并进一步探讨低渗造影剂碘海醇致细胞凋亡、氧化应激的特点和渗透压在细胞损伤中的作用。
　　 方法:1.体外培养的HK—2细胞分为培养基对照组和造影剂刺激组—泛影葡胺组，碘海醇组，碘克沙醇组。用细胞增殖/毒性试剂盒(CCK—8)分别观察各组同一浓度(100mg I/ml)不同作用时间(2h，4h，6h)和同一作用时间(6h)不同浓度(25，50，100，125mg I/ml)的细胞活力。2.HK—2细胞分为培养基对照组，碘海醇刺激组。用Hoechst33342染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态，流式AnnexinV—FITC/PI双染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase—3)活性比色法观察上述时间梯度和浓度梯度下细胞凋亡变化。3.HK—2细胞分为培养基对照组，碘海醇刺激组(100mg I/ml，6h)，甘露醇等渗对照组。CCK—8法观察细胞活力，流式Annexin V—FITC/PI双染和caspase—3活性比色法观察细胞凋亡，流式DCFH—DA细胞内标记法比较活性氧(ROS)变化。
　　 结果:1.高渗造影剂泛影葡胺和低渗造影剂碘海醇致HK—2细胞活力呈时间依赖和碘剂量依赖性下降(P＜0.01)，等渗造影剂碘克沙醇于本研究范围内未见细胞毒作用。2.碘海醇刺激组与培养基对照组比，Hoechst33342染色见细胞核浓聚，凋亡小体生成；流式双染凋亡率和caspase—3活性呈时间(P＜0.01)和碘剂量依赖性升高(P＜0.05)。3.碘海醇(100 mg I/ml、6h)组ROS较培养基对照组升高(P＜0.01)。4.甘露醇等渗对照组的细胞活力较培养基对照组无明显下降(P＞0.05)、流式双染凋亡率(P＜0.05)、caspase—3活性(P＜0.05)和ROS升高(P＜0.01)，均低于碘海醇刺激组(P＜0.05)。
　　 结论:在HK—2细胞的细胞毒损伤中，等渗造影剂碘克沙醇作用最轻、高渗造影剂泛影葡胺细胞毒力最大、低渗造影剂碘海醇居中，且后两者呈时间及碘剂量依赖性变化。碘海醇呈时间及碘剂量依赖性导致HK—2细胞凋亡率增加。氧化应激参与了细胞损伤。渗透压不能完全解释碘海醇导致HK—2细胞的直接损伤作用。
　　 第二部分：
　　 目的:1:本研究拟探讨牛磺酸对碘海醇致HK—2细胞损伤的保护作用及部分机制。
　　 方法:将体外培养的HK—2细胞分为①培养基对照组，②牛磺酸(3，12，24mmol/L)+培养基组，③碘海醇刺激组(100mg I/ml、6h)，④牛磺酸(3，12，24mmol/L)+碘海醇(100mg I/ml、6h)共作用组。1.用细胞增殖/毒性试剂盒(CCK—8)测定细胞活力；流式Annexin V—FITC/PI双染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase—3)活性比色法观察细胞凋亡。2.流式DCFH—DA细胞内标记法测定细胞活性氧(ROS)。3.选取牛磺酸(24mmol/L)+碘海醇(100mg I/ml、6小时)作为干预组，用Westen blot检测细胞Bcl—2、Bax的表达。
　　 结果:1.牛磺酸加入培养基组对细胞活力、凋亡率、caspase—3活性、ROS及Bcl—2、Bax表达无影响(P＞0.05)。2.牛磺酸呈剂量依赖性增加细胞活力，减轻凋亡。牛磺酸(3，12，24mmol/L)干预后和碘海醇刺激组比，细胞活力分别为(88.00±1.00)％，(91.33±0.58)％，(95.67±1.52)％比(76.67±1.53)％(P＜0.05)。流式Annexin V—FITC/PI双染法示细胞凋亡率分别为(8.84±1.75)％，(7.86±1.82)％，(6.30±1.50)％比(11.98±0.39)％(P＜0.01)。caspase—3的活性以培养基对照组的倍数表示，分别为(1.33±0.10)倍，(1.27±0.0)倍和(1.10±0.04)倍比(1.42±0.1)倍(P＜0.05)。3.牛磺酸可减轻碘海醇刺激HK—2细胞产生的ROS升高，但于本研究浓度范围内无剂量依赖性。以培养基对照组的倍数表示，牛磺酸(3，12，24mmol/L)干预组和碘海醇刺激组的ROS分别为(1.12±0.12)倍，(1.11±0.15)倍，(1.12±0.10)倍比(1.29±0.09)倍(P＜0.05)。4.牛磺酸可上调Bcl—2表达(P＜0.05)，Bax表达各组无变化(P＞0.05)。
　　 结论:在一定浓度范围内，牛磺酸能呈剂量依赖性保护体外培养的HK—2细胞，减轻碘海醇诱导的细胞损伤及凋亡，其部分保护机制可能与减轻细胞内氧化应激、促进Bcl—2表达上调有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩写词

声明

第一部分含碘造影剂致人肾小管上皮细胞损伤作用的研究

前言

材料和方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

第二部分牛磺酸对碘海醇损伤HK-2细胞的保护作用研究

前言

材料和方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

全文总结

综述：含碘造影剂致肾小管上皮细胞损伤作用的研究现状

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