全基因组筛选胰腺癌化疗耐药基因——探索化疗耐药与肿瘤干细胞的相关性

摘要

目的：全基因组内筛选胰腺癌选择化疗耐药的相关基因，探索化疗耐药与肿瘤干细胞的相关性。
　　 方法：通过在人胰腺癌细胞株PANC-1中建立Tet-off可调控的piggyBac转座系统，构建PANC-1细胞株的全基因组突变文库，进而在其中筛选具有特殊耐药性或是肿瘤干细胞特性的细胞亚群。
　　 结果：通过向PANC-1细胞株内转入质粒pTet-off，得到了3个细胞克隆JA1，UB3，LC5可稳定表达Tet-off基因表达调控系统；通过向JA1细胞中转入可受Tet-off系统调控的piggyBac转座系统，初步构建了PANC-1细胞株全基因组突变文库。同时，初步确立了利用软琼脂培养筛选具特殊耐药性的细胞亚群以及利用悬滴培养筛选具肿瘤干细胞特性的细胞亚群的方法学基础。
　　 结论：在PANC-1细胞株内可以建立一个可高水平表达并受到灵敏调控的Tet-off基因表达调控系统。通过进一步引入受Tet-off调控的piggyBac转座系统，可成功搭建PANC-1细胞株的全基因组筛选平台。通过软琼脂培养方法可以筛选特殊耐药的细胞亚群，通过悬滴培养方法可以筛选肿瘤干细胞特性的细胞亚群。因此，以现已搭建的平台为基础，可筛选得到具特殊耐药性或肿瘤干细胞特性的细胞亚群，进而对相关基因进行鉴定和功能验证。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

前 言

实验内容

第一部分 人胰腺癌细胞株PANC-1的生物学特点研究

材料与方法

实验结果

讨 论

第二部分 人胰腺癌细胞株PANC-1 Tet-off基因表达调控系统的建立

材料与方法

实验结果

讨 论

第三部分 利用piggyBac转座系统构建人胰腺癌细胞株PANC-1全基因组突变文库

材料与方法

实验结果

讨 论

第四部分 人胰腺癌细胞株PANC-1三维立体培养方式的初步探索

材料与方法

实验结果

讨 论

全篇小结

参考文献

致 谢