20S蛋白酶体快速分离和异质性研究及蛋白质体外甲基化修饰和行为表征

摘要

20S蛋白酶体(core particle, CP)是一个相对分子量约为700 kDa的蛋白质复合体，由14种不同亚基组成，分别称为ala7,困~阶，并共同形成一个桶状结构a7p7p7a7。在先前的研究中，CP的分离主要依赖抗体、液相色谱以及亲合标签纯化等技术。在本研究中，我们报道了一种简单快速、经济、有效的CP分离方法。该方法主要涉及多步超速离心和非变性聚丙烯酞胺凝胶电泳技术;然后，利用二维电泳结合质谱技术对分离得到的CP进行了鉴定和分析，并对不同组织细胞来源的CP进行了蛋白酶体异质性探讨。该方法不仅适合于大通量(来自红细胞)和小规模的CP(来自培养细胞)纯化，亦适合于分离不同组织细胞来源的CPo此外，我们在纯化过程中发展了一种新型的直接三维凝胶电泳技术(direct three-dimensional gel electrophoresis, d3-DE)实验结果表明，该分离方法对CP以及其它蛋白复合体的分离具有较大的学术价值。

目录

课题基金资助项目

序 言

第一部分 20S蛋白酶体快速分离和异质性研究

Abstract

前 言

材料和方法

实验结果与讨论

一.CP的分离

二.直接三维凝胶电泳技术（d3-DE）

三.蛋白酶体异质性

结 论

参考文献

第二部分 甲醇引起的蛋白质体外甲基化修饰和行为表征

Abstract

前 言

材料和方法

实验结果与讨论

一.甲醇引起的蛋白质体外甲基化修饰研究策略

二.基于质谱学的蛋白质体外甲基化修饰的筛选

三.蛋白质体外甲基化修饰的化学特性表征

结 论

参考文献

附 录

综 述

参考文献

致 谢

在读期间论文发表、专利申请及会议参加情况