急性髓系白血病Kindlins和血管生成素表达研究

摘要

血管生成素(Angiopoietins,Angs)是一组分泌型的细胞因子,主要表达在血管内皮细胞表面,其中Ang-1、Ang-2在血管生成中起主要作用。是独立于血管内皮生长因子(VEGF)之外另一种新的促内皮细胞生长因子,作用于内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶(Tie-2)发挥作用。该族细胞因子及其受体在胚胎血管发育、血管重塑、创伤修复、肿瘤血管形成等方面起着重要作用。国外学者研究表明血管生成素及其受体在白血病患者细胞及细胞系中有异常表达,与VEGF相互协调,通过自分泌和旁分泌模式参与白血病的发病过程。
　　 Kindlins是最近发现的粘着斑蛋白,它参与整合素活化、细胞迁移、增殖和分化的调控。目前已鉴定出Kindlins家族含有3个成员-Kindlin-1、Kindlin-2、Kindlin-3。人体内Kindlins异常可以导致多种遗传性疾病,例如Kindlin-1功能异常导致Kindler综合征(Kindler syndrome,KS)和Kindlin-3功能异常导致白细胞粘附缺陷(leukocyte adhesion deficiency,LAD-Ⅲ)。目前已在人类实体肿瘤(乳腺癌、前列腺癌、平滑肌肉瘤)中发现Kindlin-2与肿瘤的侵袭性及耐药性有关。
　　 研究目的:
　　 探讨不同白血病细胞系、成人急性髓系白血病Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3的表达情况。
　　 研究方法:
　　 1.在患者知情同意情况下收集中国医学科学院血液病医院白血病诊疗中心成人初诊急性髓系白血病骨髓标本。
　　 2.分离骨髓标本中单个核细胞,提取mRNA,采用RQ-PCR方法检测病人标本中Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3的表达水平。
　　 3.结合病人临床资料,分析Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3与成人急性髓系白血病关系。
　　 结果:
　　 1.Ang-1,Ang-2,Kindlin-3在K562、KG-1a、HL60、U937、Jurkat细胞系中均有表达,Tie-2仅表达于KG-1a、HL60细胞系中,Kindlin-2表达于K562、KG-1a、HL60中。
　　 2.AML患者Kindlin-2表达水平明显低于非AML者(P=0.004),而两组间Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-3表达水平未见统计学差异。
　　 3.男性患者Ang-2表达水平高于女性(P=0.013),其余4种目的基因表达无类似性别差异。
　　 4.起病时白细胞计数(WBC)≥130×109/L的患者Ang—1、Kindlin-3表达水平明显高于WBC<30×109/L组(P<0.001,P=0.049)；而Kindlin-2则相反,在WBC<30×109/L组表达较高(P=0.020)。
　　 5.AML患者治疗缓解后Kindlin-2、Kindlin-3表达明显升高(P<0.001,P<0.001)。
　　 6.国内形态学诊断分型中M2b、M3组Ang-1、Ang-2、Kindlin-3表达均低于M4、M5组及M1、M2a、M6组(分组两两比较Ang1:P<0.001,P<0.001；Ang2:P=0.010,P=0.003；Kindlin-3:P=0.027,P=0.043)；Kindlin-2则相反,在M2b、M3组中表达较高(P=0.007,P=0.032)。M4、M5组与M1、M2a、M6组五种基因表达水平未见明显差异。3组间Tie-2未见明显差异。
　　 7.Ang-1在CD56、CD15、CD19阳性组的水平均低于阴性组(P<0.001,p=0.05,P=0.025),在CD117、CD7阳性组的水平均高于阴性组(P=0.012,P<0.001)。Ang-2在CD7阳性组的水平高于阴性组(P=0.029),CD14阳性组的水平则低于阴性组(P=0.010)。Kindlin-2在MPO阳性组的水平高于阴性组(P=0.012)。
　　 8.79例患者进行了治疗疗效评价,61例获得CR,18例未获得CR。Ang-1低表达组CR率较高,且具有统计学差异(P=0.027)。Kindlin-2高表达组有高CR率的趋势,但无统计学差异(P=0.050)。五种目的基因在CR和non—CR两组间的表达水平无统计学相关性。
　　 9.Ang-1表达水平与NCCN预后分组存在相关性,它在预后差组、中等组表达均高于在良好组的表达,存在统计学差异(良好组vs中等组P=0.012；良好组vs不良组P=0.025；中等组vs不良组P=0.757)。其余四种目的基因均与NCCN预后分组无相关性。Ang-1,Ang-2在MLL重排阳性组表达水平高于阴性组,具有统计学差异(P<0.001,P=.036)；而Kindlin-2在MLL重排阳性组表达水平较低(P=0.014)。
　　 10.Ang-1表达水平随预后不良因素积分升高而升高(低分组vs中间组P=0.023；低分组vs高分组P=0.028:中间组vs高分组P=0.574); Kindlin-2表达水平则随预后不良因素积分升高而降低(低分组vs中间组P=0.050:低分组vs高分组P=0.012；中间组vs高分组P=0.278)；Kindlin-3在预后差组中表达水平较高,但不具有统计学差异(低分组vs中间组P=0.036；低分组vs高分组P=0.329；中间组vs高分组P=0.623)。
　　 11.Ang-1与Ang-2中等强度正相关(r=0.496,P<0.001),Ang-1与Kindlin-3为弱正相关(r=0.322,P=0.002),Ang-2与Tie-2为弱正相关(r-0.266,P=0.012),Tie-2与Kindlin-2为弱正相关(r=0.393,P<0.001),Tie-2与Kindlin-3为弱正相关(r=0.303,P=0.004)。余不相关。在Ang-1低表达同时伴有Kindlin-2高表达的群体(23名)CR率为100％,明显高于其它分组(P=0.022)。
　　 结论:
　　 1.相对于Ang-2、Tie-2,Ang-1与AML临床资料关系更为密切,与AML不良预后因素存在相关性。低水平Ang-1提示高CR率。
　　 2.Kindlin-2与AML良好预后因素存在相关性。高水平Kindlin-2提示高CR率。
　　 3.Kindlin-3与AML预后因素无明确相关性。