FcαR的糖基化及其异形体的功能效应

摘要

本论文分为两部分,第一部分研究了FcαR的糖基化对其与igA结合的影响；第二部分研究了Fcαr异形体的表达及定位。
　　 第一部分
　　 FcαR(CD89)是IgA的Fc受体,在IgA介导的免疫应答中发挥重要作用。FcαR是一个糖基化程度较高的蛋白质,它拥有六个潜在的N-糖基化位点。据文献报道,FcαR的异常糖基化与HIV感染、酒精性肝硬化和IgA肾病等疾病相关。本实验检测了N-糖基化对FcαR与IgA结合所发挥的作用。我们发现将稳定表达FcαR的CHO细胞用衣霉素进行去N-糖基化处理后,其与IgA的结合明显增强。为了明确FcαR引起与IgA结合增强的N-糖基化位点,我们利用点突变的方法分别把六个N-糖基化位点的天门冬酰胺(N)替换成谷氨酰胺(Q)。流式细胞分析显示N44、N120、N156、N165、N177位点去除糖基化不影响FcαR与IgA的结合,但是N58位点去除糖基化导致与IgA的结合显著增加。相似的结果也表现在稳定表达N58Q-FcαR的RBL2H3细胞(大鼠嗜碱性白血病细胞系)。除此以外,我们还发现FcαR经神经氨酸酶处理去除唾液酸后,其与IgA的结合也明显增强,而N58正是这一现象中起关键作用的位点。综上所述,我们的结果证明了N58位点的糖基化状态影响了FcαR与IgA的结合。
　　 第二部分
　　 FcαR(本文代号为A1)是IgA的Fc受体,它在IgA介导的免疫应答中发挥着重要作用。以前的研究证实,在人的髓系细胞可以检测到Δ66EC2FcαR(代号为A2)和△EC2 FcαR(代号为A3)的转录物,即EC2结构域近膜端缺失66个核苷酸的转录物和缺失完整的免疫球蛋白样EC2结构域的转录物。我们的实验主要研究了FcαR异形体(A2和A3)在CHO细胞、COS7细胞和RBL2H3细胞的表达和定位。与A1不同的是,A2和A3都不能在细胞表面表达。为了进一步探讨FcαR的胞外区影响其在细胞表面表达的氨基酸性质,我们构建了多种FcαR的缺失突变体和置换突变体。结果显示除第216位的苏氨酸以外,其余的FcαR缺失突变体均不能表达在细胞表面或者受体表达量明显降低。然而,将FcαR胞外区的一些氨基酸突变成丙氨酸,置换后的FcαR都能表达在细胞膜上。
　　 另外,我们用Western Blot也没有检测到转染至CHO细胞的A2、A3蛋白条带。这一现象很有可能是由于A2和A3胞外区存在部分氨基酸的缺失,致使其三维结构发生了改变。因此,FcαR的EC2胞外区对维持蛋白质结构的稳定性和功能性发挥重要的作用。