H5N1型禽流感病毒和甲型H1N1流感病毒致急性呼吸损伤的机理研究

摘要

一：H5N1型禽流感病毒致急性肺损伤机理的研究
　　 H5N1型禽流感病毒危害严重，目前还没有疗效显著、副作用低的防治药物，病死率可高达60％。另一方面，目前有相关报道称实验室可人造在雪貂间能相互传染的禽流感病毒，这更为我们防范生物威胁敲响了警钟。因此解析H5N1型禽流感病毒的致病机理，发现新的药物靶点的工作迫在眉睫。
　　 本研究解析了肾素-血管紧张素系统(RAS)在H5N1型禽流感病毒导致的急性肺损伤中的关键作用。研究发现H5N1型禽流感病毒可以通过下调RAS系统中关键的ACE2蛋白，并上调AngiotensinⅡ的表达水平。Ace2基因敲除小鼠则会表现出更为严重的急性肺损伤症状，而注射ACE2蛋白则可以明显缓解急性肺损伤的症状，这些实验均证明了H5N1型禽流感病毒可以通过造成RAS系统紊乱，特别是下调ACE2蛋白表达来导致急性肺损伤，ACE2蛋白可能成为新的治疗H5N1型禽流感病毒的药物。
　　 与此同时，本研究还筛选并验证了一些临床用药防治H5N1型禽流感病毒的效果。结果显示氯丙嗪可以有效预防但不能治疗H5N1型禽流感病毒，显著改善H5N1型禽流感病毒导致的急性肺损伤症状。上述研究为H5N1型禽流感病毒防治药物的研发打下了基础。
　　 二：甲型H1N1型流感病毒致急性肺损伤机理的研究
　　 一种猪流感来源的甲型H1N1流感病毒于2009年在全世界范围内暴发，可造成患者呼吸道系统损伤并可致急性肺损伤，死亡率显著高于季节性H1N1流感，造成了至少18,449人死亡，对社会和经济造成了严重影响，引发了人们对流感大流行的恐慌情绪。
　　 为了详细解析甲型H1N1流感病毒的致病机理和研发新的抗流感药物，我们首先建立了能反映人感染甲型H1N1流感病毒症状的小鼠模型，结果显示小鼠模型的病理表现与甲流病人症状相似，且达菲可以在此小鼠模型上体现出良好的早期防治效果。同时，我们发现在甲流病人血浆中IL-17A及相关细胞因子显著上升，随后在小鼠模型上发现感染甲流病毒后肺泡灌洗液中的IL-17A和Th-17相关细胞因子也显著上升。进一步利用IL-17A基因敲除小鼠和外源性给予IL-17A单克隆抗体均可以缓解甲型流感病毒导致的急性肺损伤症状，降低小鼠的死亡率。上述结果说明IL-17A在甲型流感病毒的致病过程中起着关键性作用，针对IL-17A的单克隆抗体可以作为未来防控甲型流感暴发的候选药物。

目录

图表目录

英文略语表

序言

第一部分 H5N1型禽流感病毒导致急性肺损伤机理的研究

引言

第一节 RAS系统在H5N1型禽流感病毒导致急性肺损伤过程中的研究

前言

1.实验材料

2.实验设备

3.实验方法

4.实验结果

5.结论

6.讨论

第二节 H5N1型禽流感病毒防治药物的筛选

前言

1.实验材料

2.主要仪器及设备

3.主要溶液配制

4.实验方法

5.实验结果

6.结论

7.讨论

第二部分 2009年甲型H1N1流感病毒致病机理研究

前言

1.实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验试剂

1.3 主要仪器及设备

1.4 主要溶液配制

1.5 常用缓冲液的配制

2.实验方法

2.1 甲型H1N1流感病毒的扩增

2.2 甲型H1N1流感病毒血凝价及TCID50测定

2.3 甲型H1N1流感病毒致C57 BL/6小鼠急性肺损伤模型的建立

2.4 IL-17A基因敲除小鼠感染BJ501株甲型流感病毒后相关检测

2.5 IL-17A单克隆抗体治疗甲型流感病毒感染小鼠相关检测

2.6 TNF-αRⅡ蛋白治疗感染BJ501株甲型流感病毒小鼠相关检测

2.7 2009年H1N1流感病毒感染患者的入组和细胞因子检测

2.8 BJ501株流感感染人外周血单个核细胞(PBMC)的相关检测

3.实验结果

3.1 甲型流感病人细胞因子谱

3.2 小鼠模型肺泡灌洗液细胞因子检测结果

3.3 IL-17A基因敲除小鼠可以减轻小鼠的急性肺损伤程度

3.4 IL-17A单克隆抗体可减轻BJ501株病毒导致的急性肺损伤程度

3.5 TNF-αRⅡ融合蛋白不能缓解小鼠急性肺损伤程度

3.6 灭活BJ501株H1N1流感病毒对人外周血单个核细胞的影响

3.7 IL-17A在BJ501株H1N1流感病毒感染过程中的作用通路

4.结论

5.讨论

综述

参考文献

致谢

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