人骨肉瘤细胞中点突变对NOV基因功能的影响敲低蛋白酶体亚基PSMA7抑制562细胞增殖

摘要

本论文第一部分工作是在人骨肉瘤细胞中研究点突变对NOV基因功能的影响。
　　 肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastoma over—expressed gene，NOV)是CCN家族的成员之一，与大多数CCN家族成员的结构相似，可编码细胞外基质蛋白，参与调节细胞增殖、分化、粘附以及血管形成等复杂的病理和生理过程。目前尚未完全了解NOV基因的生物学特性和功能、分子机制和调节途径，但大量的证据表明，NOV的异常与恶性肿瘤之间有明显的相关性。探讨NOV抑制或促进肿瘤的机制及调节途径，在肿瘤诊断及治疗上有临床应用前景。
　　 我们发现了在人骨肉瘤细胞MG-63中存在NOV基因编码区第125位核苷酸的点突变，并构建了这一点突变NOV基因的pcDNA3.1真核细胞表达质粒。转染到人骨肉瘤细胞Saos-2内，对比转染了pcDNA3.1-正常NOV基因组，点突变降低了NOV基因抑制细胞增殖和促进细胞迁移的能力。进一步的免疫荧光染色和Westernblot显示NOV基因的这一点突变使NOV蛋白的分泌性降低，从而使NOV基因的生物学作用发生改变。目前尚未见有对NOV基因点突变的报道。我们对NOV基因点突变的研究为揭示NOV基因的生物学功能及作用机制，以及NOV在肿瘤细胞中的作用提供了新的线索。
　　 本文第二部分工作是用siRNA靶向干扰蛋白酶体亚基PSMA7的表达抑制K562细胞增殖的研究。
　　 人蛋白酶体亚基7(PSMA7)是20S蛋白酶体核心颗粒的一个α亚基，参与组成细胞内蛋白质最主要的选择性降解途径泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasomesystem，UPS)，其编码基因定位于20q13.33染色体。PSMA7在肿瘤细胞中广泛表达，一些研究表明PSMA7参与了多种重要的肿瘤相关蛋白的表达及活性调节。目前对PSMA7功能的报道并不完全一致，提示PSMA7在不同细胞中可能有不同的作用，其功能可能有细胞或组织特异性。目前对PSMA7在白血病中的作用尚无报道。
　　 我们利用RNA干扰技术，化学合成针对PSMA7序列的siRNA，脂质体转染人髓性白血病K562细胞使其PSMA7表达水平降低，发现K562细胞增殖能力明显降低但未发生明显的凋亡，S期细胞数减少，Cyclin E蛋白水平降低，提示PSMA7通过影响细胞周期蛋白水平而抑制K562细胞的增殖。这些结果为明确PSMA7的作用机制及其在白血病中的意义提供了有益的资料。
　　 综上所述，本文第一部分发现在人骨肉瘤MG-63细胞中NOV基因编码区第125位核苷酸的点突变改变了NOV分泌性从而降低了NOV基因抑制细胞增殖和促进细胞迁移的能力;本文第二部分的研究表明敲低PSMA7可通过调节细胞周期蛋白水平抑制K562细胞的增殖速度。为进一步研究NOV及PSMA7基因功能和作用机制及其在骨肉瘤和白血病中的意义增添了新的资料。

目录

摘要

前言

材料与方法

(一)NOV基因点突变对人骨肉瘤细胞功能的影响

实验结果

(二)敲低蛋白酶体亚基PSMA7抑制K562细胞增殖

实验结果

讨论

参考文献

缩略语及中英文对照

附录

硕士期间研究经历及发表的文章

致谢

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