C18固相萃取小柱样品处理方法优化及冠心病尿液差异蛋白质组学分析

摘要

第一部分反相C18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理
　　目的:针对少量且复杂蛋白质组样品，开发一种耗时短，操作简便的预处理方法。
　　方法:以人的脑海马组织蛋白为研究对象，使用反相C18固相萃取小柱进行样品分离，并与反相高效液相色谱法进行比较分析。根据四种乙腈梯度设置方案的分离效果以确定最佳的洗脱条件。
　　结果:八种乙腈浓度洗脱仅耗时10 min，为反相高效液相色谱法的1/4，但鉴定蛋白总数占高效液相色谱法的85.5％。乙腈洗脱浓度为5％，15％，20％，90％时分离30μg人的海马多肽混合物可以得到较优的分离效果，两次重复实验鉴定蛋白重复率达到70％。
　　结论:该方法操作易行，省时，成本低，是进行蛋白质组学分析中少量样品的一个简便预处理方法。
　　第二部分基于iTRAQ定量标记串联质谱技术的动脉粥样硬化疾病尿液差异蛋白质组学分析
　　目的:针对尿液样品有易获取，处理方法简便的优点，近年来尿蛋白质组学引起人们广泛关注。以往动脉粥样硬化的尿蛋白质组学研究主要应用毛细管电泳-质谱联用技术，报道多种多肽标记物。本文从尿液蛋白质组学入手，目的在于发现动脉粥样硬化疾病在蛋白水平的表达差异。
　　方法:采用iTRAQ(Isobaric tags for relative and absolute quantitation)定量标记串联质谱分析技术从动脉粥样硬化患者及对照组尿液样品中发现差异表达蛋白。
　　结果:经过质谱分析，Mascot及Scaffold数据库检索从尿液中共鉴定856个蛋白，其中定量蛋白737个。动脉粥样硬化患者及对照组之间尿液中存在90个差异表达蛋白，倍数变化设置1.5倍。经过IPA功能分析发现差异表达蛋白与糖类，脂类代谢及炎症反应密切相关。
　　结论:尿液是动脉粥样硬化疾病标记物发现的理想来源。尿液中差异蛋白表达表达情况可以反映动脉粥样硬化疾病状态下细胞内外的病理生理变化。

目录

英文缩略语

第一部分 反相C18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理

摘要

第一章 引言

第二章 材料与方法

一．实验材料

二．实验方法

第三章 实验结果

1．八个乙腈梯度多肽预分离

2．梯度优化

3．重复性分析

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

第二部分 基于iTRAQ定量标记串联质谱技术的动脉粥样硬化疾病尿液差异蛋白质组学分析

摘要

第一章 引言

第二章 材料与方法

一．实验材料

二．实验方法

第三章 实验结果

1．蛋白鉴定与定量

2．Gene Ontology(GO)分析

3．IPA蛋白质功能分析

第四章 讨论

1．本研究概述

2．炎症反应

3．脂类代谢与炎症反应之关联

4．糖类代谢

第五章 结论

参考文献

综述：尿液中微泡体的分离方法

致谢

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