转TrkC神经干细胞联合胶原支架对创伤性脑损伤大鼠模型治疗作用的实验研究

摘要

第一部分:转TrkC神经干细胞联合胶原支架对创伤性脑损伤大鼠模型治疗作用的实验研究
　　研究背景和目的:
　　外伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）会造成严重的神经系统功能障碍，目前仍没有有效的临床治疗能逆转TBI病理进程。近年来很多临床前研究表明干细胞移植治疗在动物TBI中显示出良好的效果。另一些研究认为NT-3和生物支架能促进神经干细胞增殖及神经元分化。本研究尝试用神经干细胞联合结合NT-3的胶原材料治疗中度TBI大鼠，重点验证干细胞及胶原材料联合移植的可行性，并观察神经干细胞在体内增殖和分化成神经元的情况。
　　方法:
　　成年雄性SD大鼠，体重250 g，用Feeney自由落体打击法造成中度TBI。将大鼠随机分成四组:①TrkC-NSC+NT-3-collage组;②NSC+ collage组;③NSC组;④生理盐水组，每组6只大鼠。术后第7天移植神经干细胞和胶原支架至大鼠脑损伤灶。用改良神经功能缺失评分(mNSS)评价各组大鼠干细胞移植后1、7、14、21及28 d的行为学表现。细胞移植前1d以及细胞移植后28d行micro-PET评估损伤灶代谢情况;细胞移植前2d以及细胞移植后27d行micro-MRI评估颅内结构;移植后2周行免疫组化GFP/bax/bcl-2/nestin/ki-67/βⅢ Tubulin。
　　结果:
　　(1) TrkC基因重组腺病毒转染神经干细胞(NSCs)的最适宜感染复数为100;转TrkC神经干细胞在体外TrkC基因明显过表达。
　　(2)神经干细胞同胶原支架在体外共培养5d，荧光显微镜及扫描电镜均显示神经干细胞同胶原支架附着良好，细胞间有突起连接。
　　(3)在细胞移植14以后，TrkC-NSCs+ NT-3-collagen组和NSCs+ collage组行为学评分(mNSS)均比对照组明显低(p＜0.05)，TrkC-NSCs+ NT-3-collagen组和NSCs+ collage组之间评分无统计学差异(p＞0.05)。
　　(4)大鼠脑外伤后4周，各组损伤灶代谢活性均降低，TrkC-NSCs+ NT-3-collagen组损伤灶代谢活性最高。而NSCs+collage组损伤灶代谢活性也明显较对照组/单纯NSCs组高(p＜0.05)。
　　(5)免疫组化结果:TrkC-NSCs+ NT-3-collagen组GFP主要分布在损伤灶及周围中，小部分向脑深部迁移;TrkC-NSCs+ NT-3-collagen组损伤灶周围bcl-2/nestin/ki-67/βⅢTubulin等染色阳性率均比对照组多。
　　结论:
　　实验论证了TrkC-NSCs+ NT-3-collagen在体外培养的可行性。对于遭受中度TBI的大鼠，TrkC-NSCs+ NT-3-collagen联合移植治疗有效，可能同collage和NT-3促进神经干细胞增殖及分化成神经元有关。
　　第二部分:树状突细胞为基础的主动免疫疗法治疗胶质母细胞瘤的系统综述
　　研究背景和目的:
　　多形性胶质母细胞瘤(GBM)是最常见的原发恶性脑瘤，常规治疗后预后较差，因此有必要探索新的治疗手段来改善患者的预后。免疫疗法，尤其是树突状细胞(DC)疫苗疗法近几年来发展迅速，有成为GBM患者新的辅助治疗的潜力。我们对目前发表的相关临床试验进行了系统综述。本研究的目的是探索DC疫苗治疗有效性和安全性，主要关注并发症、中位数总生存期(mOS)、中位无进展生存期(mPFS)和生活质量等方面。
　　方法:
　　检索Medline，Pubmed，CMCC，Google Scholar，Embase，Ovid，Cochrane等，追查所有纳入研究的参考文献，检索年限均从建库检索到2015年4月，将利用DC疫苗主动免疫治疗胶质母细胞瘤形成疗效及安全性对比的临床研究(CT)纳入本项研究。评估参数为免疫反应、影像学表现、中位PFS和中位OS。并发症分为手术相关并发症及疫苗相关并发症。
　　结果:
　　本综述中共纳入19个研究，共包含352名患者。自体肿瘤细胞致敏的DC疫苗能够延长复发胶质母细胞瘤(R-GBM)(71.6-138.0wks)及新诊断胶质母细胞瘤(N-GBM)(65.0-230.4 wks)患者的中位生存时间(mOS)。
　　结论:
　　主动免疫治疗，尤其是自体肿瘤细胞致敏的DC疫苗治疗安全可行，具有延长GBM患者mOS和mPFS的潜力。需要更多的临床试验进一步揭示免疫疗法作用。

目录

第一部分：转TrkC神经干细胞联合胶原支架对创伤性脑损伤大鼠模型治疗作用的实验研究

摘要

前言

材料与方法

1．材料

2．方法

结果

1．转TrkC基因神经干细胞转染复数MOI

2．TrkC基因在NSCs中的表达

3．NSCs+collagen体外共培养鉴定

4．行为学评分

5．Micro-PET

6．Micro-MRI

7．免疫组化

讨论

1．胶原支架与干细胞移植

2．NT-3与神经干细胞移植

3．移植方式与时机

4．对行为学评分及代谢的影响

结论

参考文献

第二部分：树状突细胞为基础的主动免疫疗法治疗胶质母细胞瘤的系统综述

摘要

前言

材料与方法

1．检索策略

2．纳入及排除标准

3．疗效及副反应判定指标

结果

1．纳入文献

2．临床研究特点

3．治疗效果评估

4．安全性及并发症

结论

参考文献

综述 胶质母细胞瘤免疫治疗研究进展

英文缩略词

声明

致谢