HPV16E7靶向小干扰RNA对SiHa细胞增殖凋亡及6种抑癌基因的影响

摘要

在HPV相关肿瘤中，高危型HPV感染，是受染细胞发生恶性转化的必要条件。超过一半的HPV相关肿瘤与HPV16相关，其E6/E7基因是发挥致癌作用的主要分子，E6/p53-E7/pRB路径已被证实是其致病的重要机制之一。但越来越多的研究提示，HPV16还可能有其他途径导致HPV相关肿瘤的发生。分析HPV16阳性肿瘤细胞株及相关临床样本，发现6种基因(MT1G、NMES1、RRAD、FRP1、SPARC、TFPI2)表达显著降低，发挥抑癌基因作用。我们推测这6种基因表达水平的降低可能与HPV16 E7相关。故我们利用RNA干扰技术来验证我们的假设，同时研究实验过程中细胞增殖及凋亡的变化。
　　目的:研究HPV16 E7对抑癌基因(MT1G、NMES1、RRAD、SFRP1、SPARC、TFPI2)的mRNA表达及细胞增殖能力和凋亡水平的影响。
　　方法:SiHa细胞转染E7 SiRNA48 h后，采用qPCR检测E7及6种抑癌基因mRNA水平变化，CCK-8检测细胞增殖能力改变，流式细胞仪检测细胞凋亡水平改变。
　　结果:SiHa细胞转染后48 h，qPCR结果显示E7 mRNA显著降低(P＜0.05);6种抑癌基因的mRNA水平均显著增加(P＜0.05);增殖结果显示，实验组较阴性对照组及空白组细胞增殖水平显著降低45％左右(P＜0.05)，阴性对照组和空白组之间差异无显著性差异(P＞0.05);凋亡结果提示，实验组细胞凋亡频率为9.222％，较阴性对照组及空白组显著增加（P＜0.05），空白组与阴性对照组凋差异无统计学意义(P＞0.05)
　　结论:HPV16 E7可能是通过抑制6种抑癌基因的表达，参与细胞恶性转化的过程。

目录

英文缩略语

摘要

引言

材料及方法

细胞及SiRNA片段

实验试剂

实验仪器

实验方法

实验结果

1．转染前后细胞形态变化

2．qPCR检测E7及抑癌基因mRNA表达

3．增殖情况

4．凋亡情况

讨论

RNAi的作用机制及意义

HPV 16 E7与肿瘤

HPV 16 E7 SiRNA对SiHa细胞内6种抑癌基因的影响及意义

HPV 16 E7 SiRNA对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响及意义

结论

参考文献

相关综述 炎症性皮肤疾病的DNA异常甲基化

在读期间参与撰写的文章及参加学术活动

致谢

声明