YAP蛋白在乳腺癌细胞放射感性调节作用的研究

摘要

放射治疗是乳腺癌治疗的重要手段之一，它不仅明显提高了局部肿瘤控制率，而且提高了患者的远期生存率。但是由于一部分乳腺癌细胞具有辐射抗性，限制了放射治疗的疗效，从而导致肿瘤局部复发和转移。Hippo通路在果蝇和哺乳动物中对器官的大小和肿瘤的生长发挥关键作用。该通路的下游效应因子是YAP(Yes-associated protein，果蝇中的同源物是Yki)，其作为辅激活因子，与转录因子TEADs结合调控Hippo通路下游靶基因的表达，从而影响肿瘤细胞的增殖、分化，肿瘤大小及预后。本研究重点深入系统研究了Hippo-YAP信号通路降低乳腺癌细胞辐射敏感性的作用及其分子机制。主要结果和发现如下:
　　第一部分:YAP蛋白对乳腺癌细胞放射增敏作用
　　为了探讨YAP对乳腺癌细胞MDA-MB-231转移和放射敏感性的影响，利用pCMV-YAP，si-RNA转染法将YAP pCMV质粒和RNA干扰片段转入MDA-MB-231细胞，Western blot法检测YAP、BCL-2蛋白表达水平，transwell法和细胞划痕法检测细胞转移能力，集落形成法检测细胞存活分数。结果表明，成功构建了YAP低表达的MDA-MB-231细胞株;YAP低表达明显抑制细胞的转移;细胞受γ线照射后，YAP低表达使细胞放射敏感性增强，凋亡细胞比例增多，同时BCL-2表达明显降低。提示YAP低表达可明显抑制细胞转移;YAP低表达使细胞辐射敏感性增加很可能与下调BCL-2蛋白水平，促进凋亡有关。
　　第二部分:电离辐射对乳腺癌细胞YAP蛋白及其磷酸化蛋白的影响
　　乳腺癌细胞MCF-7，MDA-MB-231细胞系作为研究对象。两组细胞经过2、4、6、8和10Gy剂量γ射线照射后，细胞活力均有下降。两组细胞相比较，MCF-7细胞比MDA-MB-231细胞活力下降的幅度更大，故MCF-7对电离辐射更敏感;两组细胞在0、2、4、6Gy照射24h后，YAP蛋白表达含量变化不明显，但是磷酸化的YAP(p-YAP)蛋白在照射剂量≥4Gy时有不同程度的升高。给予两组细胞6Gy照射16h在通过Western Blot实验可以看出p-YAP开始出现明显的升高。由上述实验我们可知，乳腺癌细胞照射后，总YAP并无明显变化，但p-YAP在核内明显增高。

目录

论文说明

摘要

前言

第一章

1．1 实验材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 质粒与siRNA片段

1．1．3 常用试剂及耗材

1．1．4 主要试剂缓冲液的配置

1．1．5 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 细胞培养和冻存

1．2．2 载体的构建

1．2．3 Western Blot

1．2．4 γ射线照射

1．2．5 克隆形成实验

1．2．6 MTT法

1．2．7 细胞转染

1．2．8 划痕实验

1．2．9 Transwell法

1．2．10 统计方法

1．3 实验结果

1．4 讨论

第二章 YAP蛋白对乳腺癌细胞放射增敏作用

2．1 实验材料

2．1．1 细胞株

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要试剂缓冲液的配置

2．1．4 细胞培养耗材

2．1．5 主要仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 细胞的培养

2．2．2 载体的构建

2．2．3 细胞转染

2．2．4 克隆形成

2．2．5 统计学方法

2．3 实验结果

2．4 讨论

讨论与展望

参考文献

综述一 Hippo信号通路与乳腺癌的研究进展

综述二 血清肿瘤标志物与肿瘤放疗疗效评估的研究进展

缩略词表

在读期间第一作者发表的论文

致谢

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