HNYSPJ60对大鼠醋酸型慢性胃溃疡的治疗作用和机制研究

摘要

胃溃疡是最常见的上消化道疾病，具有较高的发病率和复发率。关于胃溃疡的发病机制仍未完全阐明。目前广泛认可的是胃黏膜攻击因子（胃酸和胃蛋白酶等）和防御因子（粘液和重碳酸盐等）失衡学说。此外，非甾体抗炎药(NSAIDs)的滥用、不良的饮食习惯、吸烟酗酒、应激以及幽门螺杆菌感染都会导致胃溃疡的发生。
　　HNYSPJ60是从楹树树皮中分离得到的提取物，前期研究结果显示该提取物具有改善大鼠胃溃疡的作用。本研究采用醋酸致大鼠慢性胃溃疡模型，连续灌胃给药12天，通过观察大鼠一般行为状态和胃组织形态以及测定胃溃疡面积，评价HNYSPJ60的抗慢性胃溃疡的作用。实验结果显示，HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)治疗12天可以显著逆转醋酸损伤引起的胃组织结构破坏，使溃疡面积减少38.4％(P＜0.05)。
　　炎症反应在胃溃疡的发生过程中发挥重要作用。在大鼠醋酸型慢性胃溃疡中，中性粒细胞和巨噬细胞会在粘膜损伤部位聚集，进而释放大量促炎症细胞因子，如TNF-α、IL-6、IL-1β等，从而加重胃溃疡。JNK和p38属于应激活化的MAPK，在炎症反应中发挥重要的作用。实验结果显示，与模型组大鼠相比，连续给予HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)3天后，胃组织中TNF-α和IL-6的浓度分别降低43.8％(P＜0.01）和32.7％(P＜0.01)，MPO活性降低37.3％(P＜0.01)，p38磷酸化水平显著下调，而JNK磷酸化水平、p38及JNK总蛋白水平均没有明显改变。
　　溃疡愈合主要涉及到上皮细胞增生，表皮再生，腺体重建，肉芽组织形成，新生血管形成，各种细胞和细胞基质间的相互作用等。细胞大量增殖可提供粘膜表面上皮结构，重建粘膜腺体，对溃疡愈合过程至关重要。PCNA是DNA多聚酶δ的辅助因子，可以作为细胞增殖标记物。Western blot结果显示，与正常对照组相比，醋酸损伤12天后大鼠胃组织中PCNA蛋白表达量明显增加，HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)治疗12天后PCNA蛋白表达量进一步增加。
　　细胞因子和生长因子在溃疡愈合过程中发挥重要的调控作用。EGF与其细胞表面的特定受体EGFR结合后，能够刺激细胞增殖和迁移进而促进伤口愈合。Ras/Raf/ERK1/2通路是EGFR所介导的下游信号通路之一，在细胞增殖过程中发挥重要作用。Western blot结果显示，与正常对照组相比，醋酸损伤12天后大鼠胃组织中p-ERK1/2蛋白表达无明显变化。HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)治疗12天可以显著提高胃组织中p-ERK1/2蛋白水平。各组间ERK1/2蛋白表达量无明显差异。为了探究ERK1/2上游信号通路，选择给药7天作为取材时间点。Western blot结果显示，模型组大鼠胃组织中p-MEK1/2、p-c-Raf和EGFR蛋白表达无明显变化，EGF蛋白表达明显减少。与模型组相比，HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)治疗7天后大鼠胃组织中p-MEK1/2、EGF和EGFR蛋白明显增加，p-c-Raf蛋白以及MEK1/2和c-Raf总蛋白表达量均无明显差异。免疫组化结果显示，与正常对照组相比，EGF和EGFR在模型组大鼠胃腺基底部表达为弱阳性。HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)治疗7天后，EGF和EGFR在溃疡边缘增殖带和胃腺体底部大量表达。
　　综上所述，HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)可以有效地改善大鼠醋酸型慢性胃溃疡，其作用机制可能是通过抑制p38炎症信号通路的过度激活从而减轻溃疡形成期胃组织炎症反应;同时HNYSPJ60(200mg·kg-1，i.g.)还可以激活EGF-R-ERK信号通路从而促进溃疡愈合期大鼠胃组织中细胞的增殖过程。

目录

摘要

英文缩略词表(Abbreviation)

前言

1．实验动物

2．药品与试剂

3．仪器与设备

4．溶液配制

二、实验方法

1．HNYSPJ60抗大鼠胃溃疡的药效学评价

2．HNYSPJ60抗胃溃疡的作用机制探究

3．统计学分析

实验结果

一、HNYSPJ60抗大鼠慢性胃溃疡药效学评价

1．HNYSPJ60对胃溃疡大鼠一般行为状态的影响

2．HNYSPJ60对胃溃疡大鼠胃组织形态和溃疡面积的影响

二、HNYSPJ60保护胃溃疡的抗炎作用机制探究

1．HNYSPJ60对胃溃疡大鼠胃组织中TNF-α、IL-6含量的影响

2．HNYSPJ60对胃溃疡大鼠胃组织中MPO活性的影响

3．HNYSPJ60对胃溃疡大鼠胃组织中p38和JNK磷酸化水平的影响

三、HNYSPJ60促进胃溃疡愈合的作用机制探宄

1．HNYSPJ60对胃溃疡大鼠胃组织病理变化的影响

2．HNYSPJ60对大鼠胃组织中PCNA的影响

3．HNYSPJ60对大鼠胃组织中EGF-R-ERK1／2信号通路的影响

讨论

结论

参考文献

综述 表皮生长因子及其受体与胃溃疡愈合

致谢

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