芍药苷单用或联合氟康唑对小鼠系统性白念珠菌感染的作用及机制研究

摘要

目的:评价芍药苷单用或联合氟康唑在小鼠系统性白念珠菌感染模型中的作用及其可能的作用机制。
　　方法:在本次实验中，小鼠随机分成5组（每组10只）:阳性对照组、芍药苷组、氟康唑组、芍药苷+氟康唑组及阴性对照组。除了阴性对照组，各组均给予尾静脉注射白念珠菌标准菌株ATCC5314细胞悬液，构建小鼠系统性白念珠菌感染模型。在白念珠菌感染前5天，阳性对照组、氟康唑组及阴性对照组给予生理盐水灌胃，其余组给予芍药苷灌胃。感染后继续给药10天，阳性对照组和阴性对照组给予生理盐水灌胃，其余组给予相应的药物（芍药苷、氟康唑或两者合用）灌胃。在自念珠菌系统感染后观察30天，记录各组小鼠的一般状况、死亡时间及死亡数目。为了进一步分析可能的免疫机制，在感染后第10天，取小鼠眼球静脉血，利用luminex法测细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-22、IL-4、IL-17等细胞因子的水平;与此同时，利用流式细胞分析Th1(IFN-γ+CD4+T细胞)、Th17(IL-17+CD4+T细胞)及Th2(IL-4+CD4+T细胞)细胞的比例。颈椎脱臼处死小鼠，留取各脏器组织，通过比较各脏器的组织病理学改变和脏器菌载量评估炎症感染程度。另外在感染后第30天，每组随机选取4只存活小鼠，颈椎脱臼处死，留取肝、肾、脾进行称重、研磨、培养和菌落计数。
　　结果:
　　(1)计算小鼠30天的平均生存时间（单位天）:阳性对照组10.4±2.50，芍药苷组8.2±1.75，氟康唑组29±3.16，芍药苷+氟康唑组24.6±6.55，阴性对照组30。相对于阳性对照组，芍药苷组缩短了小鼠的平均生存时间(p＜0.05);相对于氟康唑组，芍药苷+氟康唑组的小鼠的平均生存时间同样缩短，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
　　(2)血清细胞因子结果显示:阳性对照组血清细胞因子IFN-γ、IL-17及IL-22的水平高于芍药苷组，而IL-4水平降低。相对于氟康唑组，芍药苷+氟康唑组血清细胞因子IFN-γ、IL-17及IL-22的水平下降，而IL-4水平升高（p＜0.05)。
　　(3)流式细胞分析表明:相对于阳性对照组，芍药苷组Th1(IFN-γ+CD4+)、Th17(IL-17+CD4+)细胞比例下降，而Th2(IL-4+CD4+)细胞的比例上升（p＜0.05)。相对于氟康唑组，芍药苷+氟康唑组Th1(IFN-γ+CD4+T细胞)、Th17(IL-17+CD4+T细胞)比例下降，而Th2(IL-4+CD4+T细胞)的比例上升(p＜0.05)。
　　(4)计算感染后第10天、30天，小鼠肾脏菌落计数，实验第10天各组肾脏菌落计数为:阳性对照组4.97±0.65，芍药苷组5.10±0.37，氟康唑组3.21±0.11，芍药苷+氟康唑组4.61±0.14，阴性对照组0，阳性对照组肾脏载菌量多于芍药苷组(P＜0.05)，芍药苷+氟康唑组肾脏载菌量大于氟康唑组，统计学上有明显意义（P＜0.05）。实验第30天氟康唑组肾脏载菌量为:3.49±0.52，芍药苷+氟康唑组肾脏载菌量:5.03±0.55，两组间差异具有统计学意义(p＜0.05)。
　　结论:
　　1.本实验初步证实，芍药苷单用或者联合氟康唑在小鼠系统性白念珠菌感染模型中增加了肾脏载菌量，缩短了小鼠平均生存时间，这提示应用芍药苷会加重小鼠系统性白念珠菌感染，在真菌感染性疾病中应尽量避免使用含有芍药苷的药物。
　　2.这项实验说明:应用芍药苷后小鼠系统性白念珠菌感染加重，这可能与抑制了淋巴细胞分化为Th1、Th17细胞，促进了其分化为Th2细胞有关。

目录

常用英文缩略语

摘要

前言

1．材料和方法

1．1 实验材料

1．1．1 实验动物和实验菌株

1．1．2 实验主要耗材与试剂

1．1．3 实验主要仪器与设备

1．1．4 实验常用液体配制

1．2 实验方法

1．2．1 分组及处理

1．2．2 生存曲线

1．2．3 luminex测细胞因子

1．2．4 流式细胞检测T细胞增殖分化

1．2．5 组织病理(HE、PAS染色)

1．2．6 菌落计数

1．3 统计方法

2．结果

2．1 成功构建系统性白念珠菌感染小鼠模型

2．2 芍药苷单用或联合氟康唑可降低系统性念珠菌感染小鼠的平均生存时间

2．4 芍药苷单用或联合氟康唑抑制IFN-γ+CD4+T、IL-17+CD4+T细胞的分化，促进IL-4+CD4+T细胞的分化

2．5 芍药苷单用或联合氟康唑不能缓解系统性念珠菌感染小鼠的肾脏病理改变

2．6 芍药苷单用或联合氟康唑会增加系统性白念珠菌感染小鼠的肾脏载菌量

3．讨论

参考文献

附

致谢

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