华蟾素在对小鼠系统性白念珠菌感染中免疫调节作用的研究

摘要

【目的】观察华蟾素对小鼠腹腔激活巨噬细胞（Mφ）体外抗白念珠菌活性的影响及其机制，以探讨华蟾素在体外抗白念感染中的作用，同时探讨华蟾素在体内抗小鼠系统性白念珠菌感染中的作用，为其临床抗白念感染的应用提供实验依据。
　　【方法】第一部分体外实验：1.分离纯化小鼠腹腔巨噬细胞，用脂多糖（LPS）激活，与不同浓度华蟾素共同培养24h，弃上清，再与一定浓度的白念珠菌共同培养4h。收集 Mφ培养液上清用于细胞因子活性测定，细胞用于吞噬活性杀伤功能检测。2.用平皿稀释法测定每毫升白念珠菌菌落形成单位（CFU/ml），以检测华蟾素对Mφ吞噬杀伤白念的影响。3.用酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞培养上清液中 TNF-α浓度，以检测华蟾素对激活 Mφ分泌 TNF-α的影响。4.以 Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮（NO）的浓度，以检测华蟾素对激活Mφ分泌NO的影响。第二部分体内实验：①建立用环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型，设立处理组（白念珠菌感染前注射华蟾素）和对照组（白念珠菌感染前注射等剂量无菌 PBS）。②在白念珠菌感染第2天、第3天、第7天，用平皿稀释法检测处理组和对照组小鼠肾、脾组织菌落形成单位（CFU）的数目，通过对比来评估华蟾素抗白念珠菌活性。③小鼠感染第2天、第3天、第7天制作肾、脾组织病理学标本，评估真菌感染情况。④通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对比两组小鼠感染第2天、第3天、第7天脾干扰素γ分泌水平，以此探求华蟾素在对小鼠系统性白念珠菌感染中免疫调节作免疫防护中作用的机制。
　　【结果】1.当华蟾素的浓度为0.2mg/mL及0.4mg/mL时，其白念生长抑制率分别为35.6%、38.5%，与单纯巨噬细胞对照组（抑制率28.4%）比较差异有显著性（P<0.05），说明华蟾素可显著增强 Mφ对白念的吞噬杀伤活性；2.当华蟾素浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.4mg/mL时， Mφ分泌 TNF-α的水平明显增高，与对照组相比差异有显著性（P<0.05）；3.当华蟾素浓度分别为0.1、0.2、0.4mg/mL时，则Mφ产生NO的水平与对照组相比明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）。在小鼠感染白念珠菌第2天、第3天、第7天，处理组肾 CFU分别为4.9953±0.0726、4.7751±0.1780、3.9547±0.1234，对照组肾脏 CFU分别为5.7865±0.1095、6.0970±0.0794、5.9958±0.0817，处理组肾脏 CFU值低于对照组，差异具有显著性（P<0.01）。处理组脾脏 CFU分别为5.2360±0.0696、4.6332±0.1139、3.5120±0.3120，对照组脾脏CFU为5.3579±0.1174、4.7599±0.1207、3.6385±0.1851，处理组脾脏 CFU值低于对照组，差异无显著性（P>0.05）。肾组织病理学评分处理组低于对照组，处理组比对照组感染的程度减轻，有显著差异性(P<0.05）；脾组织病理学评分处理组低于对照组，差异无显著性（P>0.05）。检测脾干扰素γ分泌水平，感染第2天、第3天、第7天，处理组为73.5312±5.9701pg/ml、92.1207±7.5136pg/ml、108.5212±9.2921pg/ml,对照组为40.2389±4.1956pg/ml、59.3161±5.1913pg/ml、64.3723±5.1912pg/ml，处理组高于对照组，具有显著差异性（P<0.01）。
　　【结论】华蟾素可以显著促进激活的巨噬细胞对白念珠菌的吞噬杀伤功能，这种促进作用可能与其促进巨噬细胞分泌 TNF-α及 NO有关，因此华蟾素在体外具备有增强巨噬细胞抗白念珠菌感染的功能，而在小鼠系统性白念珠菌感染中具有保护作用，作用机制可能主要通过刺激干扰素γ的产生从而增强了机体的抗真菌作用。

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缩略词表

前言

材料与方法

一、动物

二、试剂与仪器

三、实验方法

结果

1.不同浓度华蟾素对小鼠腹腔激活巨噬细胞抗白念珠菌活性的影响

2.华蟾素对小鼠腹腔激活巨噬细胞TNF-α分泌水平的影响

3.华蟾素对小鼠腹腔巨噬细胞NO分泌水平的影响

4.细胞活力检测结果

讨论

结语

参考文献

文献综述: 细胞因子在抗白念珠菌感染中的作用

发表论文情况：

致谢