中性粒细胞激活在冠状动脉扩张发病机制中的作用研究

摘要

目的：冠脉扩张是一种以冠状动脉管腔异常扩大为表现的疾病。中性粒细胞激活可能参与到冠脉扩张的发病机制中。中性粒细胞激活后会释放胞内颗粒，包括蛋白酶、髓过氧化物酶等蛋白。目前研究已发现冠脉扩张患者中血浆中性粒细胞来源的丝氨酸蛋白酶水平升高，会破坏血管壁并导致冠脉扩张。目前中性粒细胞常用的激活标志有胞内髓过氧化物酶指数(MPXI)降低和血浆髓过氧化物酶(MPO)含量升高。中性粒细胞胞外捕获网(NETs)是中性粒细胞脱颗粒后的残骸。本研究的目的一是探究冠脉扩张患者外周血中性粒细胞是否存在激活现象。目的二是研究激活现象的病因。目的三是探索中性粒细胞胞外捕获网与冠脉扩张的关系。
　　方法：本研究使用行冠脉造影的受试者的外周血样本作为研究对象。第一部分纳入了61位冠脉扩张患者，82位冠脉狭窄患者以及75位冠脉正常患者。第二及第三部分纳入了冠脉扩张患者、冠脉狭窄患者以及冠脉正常患者各30位。使用流式细胞化学血细胞计数仪(ADVIA2120)分析胞内髓过氧化物酶指数(MPXI)。使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆髓过氧化物酶浓度。在部分二和三中使用ELISA法测定受试者血浆黏附分子、抗体滴度、炎症介质、分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)和NETs含量。此外还使用PicoGreen试剂测定dsDNA含量，以定量反映NETs浓度。
　　结果：冠脉扩张患者中MPXI降低，血浆MPO含量升高。MPXI与MPO成负相关关系。此外冠脉扩张患者血浆黏附分子浓度升高，白细胞介素1p可能是中性粒细胞激活的原因。冠脉扩张患者中NETs含量升高。
　　结论：本研究首次同时使用胞内外髓过氧化物酶含量检测法证明冠脉扩张患者外周血中性粒细胞存在广泛激活。冠脉扩张患者外周血中性粒细胞发生激活，释放胞内颗粒并生成NETs，加重血管壁的降解。中性粒细胞激活的原因可能是白细胞介素1β水平升高。

目录

摘要

前言

第一部分：中性粒细胞激活与冠状动脉扩张

1．受试者来源

2．酶联免疫吸附法测定血浆髓过氧化物酶含量

3．中性粒细胞胞内髓过氧化物酶检测

4．统计学处理

三、结果与讨论

1．中性粒细胞胞内髓过氧化物酶检测结果及ADVIA2120检测结果

2．冠脉扩张患者血浆髓过氧化物浓度检测结果

四、小结

第二部分：冠脉扩张患者中性粒细胞激活原因研究

一、引言

二、材料与方法

1．受试者来源

2．中性粒细胞分离及冻存

3．抗中性粒细胞胞浆抗体测定、抗内皮细胞抗体测定

4．血浆黏附分子测定

5．血浆炎症因子测定

三、结果与讨论

1．冠脉扩张患者血浆黏附分子升高

2．冠脉扩张患者血浆激活因子变化

3．ANCA和AECA抗体水平与冠脉扩张无关

四、小结

第三部分：中性粒细胞胞外捕获网与冠状动脉扩张

一、引言

二、材料与方法

1．受试者来源

2．Picogreen法测定患者血浆游离dsDNA含量

3．捕获法ELISA测定MPO-DNA复合物

4．NETs产生相关蛋白SLPI测定

5．NETs产生相关激活因素测定

7．统计学处理

1．冠脉扩张患者血浆NETs含量升高，血浆SLPI含量上升

四、小结

结论

参考文献

附录

致谢

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