先天性无痛无汗症的遗传学研究

摘要

先天性无痛无汗症(congenital insensitivity to pain with anhydrosis，CIPA)又称为遗传性感觉和自主神经病变Ⅳ型，是一种以无汗和对疼痛刺激不敏感为基本特征的罕见的常染色体隐性遗传病。患儿出生即有发育缺陷，常见不明原因高热，死亡率高。人群中该病发病率极低，临床误诊率高。近年来随着临床诊断和分子检测手段的发展，国内外不断有CIPA病例和遗传学研究被报道，但目前中国尚无CIPA大样本的遗传学研究。 目的:采用成熟的基因检测平台，对中国人群CIPA家系进行致病基因突变的研究，探索中国人群CIPA患者的致病基因突变谱，为该病的分子水平诊断和遗传咨询提供依据。 方法:本研究采用Sanger测序和高通量测序相结合的方法进行CIPA家系的致病突变研究。采集CIPA患者临床信息及患者与家系成员外周血样本，采用酚-氯仿法提取外周血基因组DNA，对家系中先证者NTRK1基因外显予及其邻近区域进行Sanger测序，筛查点突变和indel突变。采用长片段PCR和实时荧光定量PCR的方法检测ⅣTRK1基因的大片段缺失。对于上述方法未找到致病突变的家系，选择全基因组测序的方法进一步对NTRK1内含子深部进行突变筛查，并针对候选致病突变在家系成员中进行突变验证。对于筛查到的内含子非经典剪接突变，采用Minigene及患者外周血mRNA分析的方法验证突变致病性。 结果:通过对34个CIPA家系的遗传学研究，鉴定出27种NTRK1致病突变，包括新突变15种，已报道突变12种。最常见突变为c.851-33T＞A和c.287+2dupT，突变等位基因频率为35％(24/68)。此外，发现一个反复出现的Alu元件介导的染色体内非等位基因同源重组导致大片段缺失(c.428-374_718+485del);通过全基因组测序，在四个无关CIPA家系中首次鉴定出一个内含子深部突变(c.[851-794C＞G;851-798C＞T])，该突变导致mRNA的剪接异常。 结论:在中国人群中开展较大CIPA样本的致病基因突变研究，鉴定出多个新型突变，并在NTRK1基因中，首次鉴定出内含子深部突变和Alu元件介导的大片段缺失，获得具有代表性的、较完整的NTRK1基因突变谱，有助于CIPA患者的精准诊疗。

目录

摘要

一、前言

二、材料与方法

1．研究对象

2．主要仪器设备及试剂

(二)实验方法

1．技术路线

2．家系资料的采集

3．家系样本的采集和处理

4．NTRK1基因的突变检测

5．候选突变致病性分析

三、结果

(一)临床表现

(二)CIPA家系的突变鉴定

1．NTRK1基因外显子及其毗邻区域一代测序分析

2．家系22的突变分析

3．内含子突变的Mini-gene分析结果

4．大片段缺失的检测结果

5．深部内含子突变的检测

6．新突变的致病性预测

7．NTRK1致病突变谱总结

四、讨论

五、结论

参考文献

英文缩略语

应用软件、网站及数据库

致谢

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