奶及奶制品鉴别方法的研究

摘要

本研究分别从蛋白质水平和DNA水平对奶及奶制品的鉴别方法进行了研究，其鉴别和检测方法如下:
　　 1、以5种不同品牌纯牛奶、骆驼奶、水牛奶、牦牛奶、羊奶和豆浆为研究对象，运用SDS-PAGE法电泳，银染后的蛋白图谱与微流体芯片电泳法进行了比较，从两种电泳方法的凝胶图上可以看出5种纯牛奶的蛋白质电泳图相同。采用SDS-PAGE法鉴别时，骆驼奶、豆浆可以有效地区分开，但牛奶、羊奶、水牛奶、牦牛奶不易区分开。运用微流体芯片电泳，在有效地对骆驼奶和黄豆浆进行区分外，还能对牛奶、牦牛奶、羊奶和骆驼奶也进行一定程度的区分。两种方法的灵敏度相近，但是微流体芯片电泳的优势在于其快速、准确和高效。
　　 2、采用了PCR法对牛奶、羊奶、水牛奶、骆驼奶和豆奶进行了鉴别，其中，牛奶和骆驼奶均以cytb为目的基因，分别扩增出大小为725 bp和363 bp的DNA片段，羊奶以ATP6为目的基因，能扩增出大小为292 bp的DNA片段，水牛奶以12SrRNA为目的基因片段，能扩增出大小为328 bp的DNA片段，黄豆浆以cytf为目的基因，扩增出大小为510 bp的DNA片段，各引物对对于其它物种无非特异性扩增，同时，采用了两种限制性内切酶验证该扩增的特异性。依据物种之间基因序列的差距设计的引物，能够同时对这几种液态奶鉴别，是一种简单、可靠的液态奶鉴别方法。
　　 3、对于同源性较强的牛、水牛和牦牛，以12SrRNA为目的基因片段，设计其通用性引物，牛和牦牛能扩增出长度为375 bp的DNA片段，水牛能扩增出大小为376 bp的片段。对于牛奶和水牛奶的鉴别，采用Msap1Ⅰ进行酶切反应，牛的PCR产物能别切割成大小为90 bp和285 bp的片段，水牛的PCR产物能别切割成大小为91 bp、141 bp和144 bp的DNA片段，但对于牛和牦牛的鉴别，采用的是Msap1Ⅰand PacⅠ双酶切反应，牛PCR产物的酶切片段为90 bp和285 bp，牦牛的PCR产物酶切片段为82 bp、90 bp和203 bp。PCR-RFLP能有效地对牛奶、水牛奶和牦牛奶进行鉴别，并且能对水牛奶和牦牛奶中掺杂牛奶进行检测，其掺假检测限至少能达到5％。
　　 4、本部分主要是采用荧光定量PCR的方法对牛奶、水牛奶、牦牛奶、羊奶和骆驼奶进行了研究。通过设计牛的特异性引物和特异性探针，能够快速、准确的对牛奶进行鉴别研究，同时也为哺乳动物奶掺杂牛奶的鉴别提供了依据。

目录

声明

学位论文数据集

摘要

第一部分 文献综述

1．1 蛋白质为基础的检测方法

1．1．1 凯氏定氮法

1．1．2 电泳法

1．1．3 酶联免疫吸附法(ELISA)

1．1．4 色谱法

1．2 DNA为基础的检测方法

1．2．1 聚合酶链式反应(PCR)

1．2．2 多重PCR技术

1．2．3 PCR-RFLP

1．2．4 荧光定量PCR(FQ-PCR)

1．3 DNA测序法

1．4 本课题的选题意义及研究重点

1．4．1 本课题的选题意义

1．4．2 研究重点

第二部分 通过SDS-PAGE和微流体芯片电泳进行六种液态奶的鉴别研究

2．1 材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验方法

2．2 结果与分析

2．2．1 SDS-PAGE

2．2．2 微流体芯片电泳

2．3 小结

2．4 讨论

2．4．1 蛋白质纯度的影响

2．4．2 蛋白质浓度的影响

2．4．3 电泳系统对蛋白质的迁移率的影响

2．4．4 微流体芯片电泳与蛋白质银染的比较

第三部分 运用PCR技术对五种液态奶鉴别的研究

3．1 材料与方法

3．1．1 实验材料、仪器与试剂

3．1．2 实验方法

3．2 结果与分析

3．2．1 牛特异性引物

3．2．2 羊特异性引物

3．2．3 水牛特异性引物

3．2．4 骆驼特异性引物

3．2．5 黄豆特异性引物

3．2．6 酶切结果

3．3 小结

3．4 讨论

3．4．1 检测方法的可行性

3．4．2 检测方法的准确性

3．4．3 该方法用于其它产品的检测分析

第四部分 运用PCR-RFLP法对牛奶、水牛奶和牦牛奶进行鉴别

4．1 材料与方法

4．1．1 实验材料、仪器与试剂

4．1．2 实验方法

4．2 结果与分析

4．2．1 基因测序结果

4．2．2 三种奶的酶切结果

4．2．3 检测限的测定结果

4．3 小结

4．4 讨论

4．4．1 引物的设计

4．4．2 限制性内切酶的选择

4．4．3 检测限的测定

第五部分 运用荧光PCR法对牛奶进行鉴别

5．1 材料与方法

5．1．1 实验材料、仪器与试剂

5．1．2 实验方法

5．2 结果与分析

5．2．1 探针特异性

5．2．2 荧光PCR结果

5．3 小结

5．4 讨论

5．4．1 引物和探针的设计

5．4．2 检测限的界定

第六部分 总结

参考文献

附录

致谢

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