雨生红球藻中虾青素提取及藻蛋白固定酶的研究

摘要

雨生红球藻一种普遍存在的绿藻，属于团藻目，红球藻科，是生产虾青素的天然来源之一。虾青素作为类胡萝卜素中的叶黄素类，在鱼类的着色及人体抗氧化等方面具有极其重要的应用。
　　本文研究了雨生红球藻中虾青素的提取方法。分别在细胞壁破碎方法和提取溶剂筛选以及提取机理研究方面进行了研究。研究结果表明二甲基亚砜作更适合作为提取溶剂。对比酸处理、超声破壁和反复冻融三种破壁方法，并结合虾青素提取率和扫描电镜图，结果表明酸处理藻细胞破壁效果较好。酸处理后的虾青素最高提取含量可达到0.353％。采用酸处理破壁与超声破壁联用，虾青素提取含量可达到0.425％。
　　本文研究了微藻中蛋白用于固定酶。藻蛋白种类较多，利用交联酶聚集体方法将藻蛋白制备成固定酶载体。通过戊二醛作为交联剂，把藻蛋白交联为微米级的蛋白聚集体。通过NHS/EDC法活后，用于共价键固定D-氨基酸氧化酶。研究了蛋白聚集体固定酶的动力学。与游离酶相比，固定酶提高了与底物亲和性。通过荧光蛋白表征交联效果可知，交联蛋白能够在蛋白聚集体上分布较为均匀。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 虾青素简介

1．1．1 虾青素背景介绍

1．1．2 虾青素的化学结构

1．1．3 虾青素的来源

1．1．4 虾青素的提取及分析

1．1．5 虾青素的应用

1．2 固定酶概述

1．2．1 固定化技术

1．2．2 固定化酶载体

1．2．3 固定化酶的应用

1．3 交联酶聚集体

1．3．1 交联剂戊二醛

1．3．2 戊二醛交联原理

1．3．3 交联酶聚集体制备

1．4 DAAO简介

1．4．1 DAAO催化反应机理

1．4．2 DAAO结构性质

1．4．3 DAAO的生理活性

1．5 论文的主要内容及意义

第二章 雨生红球藻中虾青素的提取

2．1 引言

2．2 材料与试剂

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验试剂

2．2．3 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 虾青素含量测定方法

2．3．2 不同溶剂提取虾青素的提取含量比较

2．3．3 雨生红球藻不同破壁方法提取虾青素研究

2．3．4 酸处理破壁法中因素优化

2．3．5 不同种破壁方法的联用

2．3．6 FITC标记法探究雨生红球藻中提取虾青素机理

2．4 结果与讨论

2．4．1 虾青素标准曲线测定

2．4．2 不同提取溶剂对虾青素提取含量的影响

2．4．3 不同破壁方法对虾青素提取含量的影响

2．4．4 不同酸浓度条件对虾青素提取含量的影响

2．4．5 不同料液比对虾青素提取含量的影响

2．4．6 酸处理破壁法与超声破壁法联用

2．4．7 FITC标记法探究雨生红球藻中提取虾青素机理

2．4．8 酸破壁方法与未破壁方法提取机理探究

2．4．9 甲醇、乙醇、异丙醇三种醇提取虾青素比较

2．5 本章小结

第三章 蛋白球载体制备及活化

3．1 引言

3．2 材料和试剂

3．2．1 实验材料

3．2．2 实验试剂

3．2．3 实验仪器

3．3 实验方法

3．3．1 微藻中杂蛋白的提取

3．3．2 蛋白球载体的制备

3．3．3 蛋白球载体的活化

3．4 结果与讨论

3．4．1 戊二醛浓度对蛋白球载体交联的影响

3．5 本章小结

第四章 DAAO的表达纯化及蛋白球载体固定酶

4．1 引言

4．2 材料与试剂

4．2．1 实验材料

4．2．2 实验试剂

4．2．3 实验仪器

4．3 实验方法

4．3．1 DAAO表达

4．3．2 DAAO纯化

4．3．3 DAAO与蛋白球载体的交联

4．3．4 游离酶与固定酶的米氏方程测定

4．3．5 荧光蛋白(GFP)表征交联效果

4．4 结果与讨论

4．4．1 DAAO纯化电泳图

4．4．2 蛋白标准曲线

4．4．3 游离酶与固定酶的米氏方程测定

4．4．4 GFP纯化电泳图

4．4．5 荧光蛋白表征图

4．5 本章小结

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

致谢

研究成果和发表的学术论文

作者和导师简介