多种兴奋剂及其代谢产物超高效液相色谱质谱联用检测方法研究

摘要

为维护竞技体育的公平和纯洁，保护运动员的身心健康，兴奋剂检测已成为所有体育比赛中不可或缺的重要环节。兴奋剂种类繁多，结构差异大，并且随着时间的推移不断有新的兴奋剂涌现。为满足兴奋剂检测的要求，兴奋剂检测实验室需要不断完善检测程序，提高检测方法的灵敏度和准确性。兴奋剂的检测技术也在不断发展，以前曾采用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用(GC/MSD)等方法进行检测。为有效解决某些药物检测过程中需要衍生化、操作复杂、检测周期长、灵敏度较差等问题，很多实验室已经采用更为先进的、灵敏度更高的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱联用检测方法。本论文采用先进的高效液相色谱串联三重四极杆质谱，以及四极杆-静电场轨道离子阱高分辨质谱进行兴奋剂检测研究工作。本研究主要包括以下二方面:
　　1、建立12种兴奋剂阿佐塞米(1)、丁氢氯噻嗪(2)、布林佐胺(3)、苄氢氯噻嗪(4)、氯拉扎尼(5)、氯索隆(6)、西氯他宁(7)、多佐胺(8)、喹乙唑酮(9)、芬喹唑(10)、美替克仑(11)和曲美他嗪(12)的液相色谱-质谱联用检测方法，并进行方法学验证。12种兴奋剂的检测限(LOD)在0.01-10ng/mL之间;线性范围(R2＞0.99)分别为3.0-700 ng/mL、1.5-1000ng/mL、3.0-4000 ng/mL、3.0-1500 ng/mL、3.0-300 ng/mL、0.3-500 ng/mL、0.03-4000 ng/mL、6.0-5000 ng/mL、6.0-600 ng/mL、30-1600 ng/mL、6.0-5000 ng/mL和3.0-500 ng/mL;低、中和高三个浓度水平的日内和日间变异系数均小于15％。该方法灵敏度高、线性范围宽、准确度和重现性好，已应用于反兴奋剂中心实验室常规检测程序中。
　　2、对阿佐塞米和曲美他嗪进行了代谢产物的研究工作。本研究采用固相萃取技术对样品进行前处理，使用四极杆-静电场轨道离子阱高分辨质谱进行分析，筛查出大鼠受试尿样中5种阿佐塞米代谢产物，其中2种为已知代谢产物，3种为本研究首次发现;检出曲美他嗪人体受试尿样中13种代谢产物，其中7种已有文献报道，6种为新代谢产物。该研究成果可拓宽阿佐塞米和曲美他嗪二种兴奋剂的检测窗口，从而发现更多的阳性案例。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 兴奋剂概述

1．2 兴奋剂的种类

1．2．1 蛋白同化制剂(S1)

1．2．2 肽类激素、生长因子及相关物质(S2)

1．2．3 β2-激动剂(S3)

1．2．4 激素及代谢调节剂(S4)

1．2．5 利尿剂和掩蔽剂(S5)

1．2．6 刺激剂(S6)

1．2．7 麻醉剂(S7)

1．2．8 大麻(酚)类(S8)

1．2．9 糖皮质激素类(S9)

1．2．10 禁用方法

1．3 兴奋剂的危害和治疗功效

1．3．1 兴奋剂的危害

1．3．2 兴奋剂作为药物的治疗功效

1．4．1 兴奋剂管制概述

1．4．2 兴奋剂检查

1．4．3 兴奋剂的检测

1．5 兴奋剂代谢产物

1．5．1 兴奋剂代谢产物在体内的产生过程

1．5．2 质谱在兴奋剂代谢产物结构确证中的应用

1．6 本课题研究内容和意义

第二章 12种兴奋剂液相色谱-三重四极杆质谱检测方法的建立及验证

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 实验仪器及药品

2．2．2 溶液及制备

2．2．3 液相色谱条件

2．2．4 质谱条件

2．2．5 样品前处理

2．3 结果与讨论

2．3．1 样品的前处理方法优化

2．3．2 质谱条件优化

2．3．3 方法学验证

2．4 结论

第三章 超高效液相色谱-静电场轨道离子阱高分辨质谱对阿佐塞米和曲美他嗪代谢产物的检测

3．1 前言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器与样品

3．2．2 阿佐塞米SD大鼠的体内受试

3．2．3 曲美他嗪人体受试

3．2．4 样品前处理

3．2．5 色谱条件

3．2．6 质谱条件

3．3 结果与讨论

3．3．1 色谱条件和质谱条件优化

3．3．2 体内代谢时间的分析

3．3．3 代谢产物筛查与鉴定结果

3．3．4 代谢产物实验流程

3．3．5 所建立代谢产物检测方法的特点

3．4 小结

第四章 结论

参考文献

致谢

研究成果及所获奖励

作者和导师简介

附录