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摘要
第一章 绪论
1.1 前言
1.2 生物信息学
1.2.1 生物信息学概述
1.2.2 生物信息学主要研究内容
1.3 本研究涉及的生物信息学手段
1.3.1 蛋白序列分析——序列比对
1.3.2 蛋白结构预测——同源建模
1.3.3 蛋白质与底物分子作用关系——分子对接
1.3.4 体系环境因素对蛋白质结构的影响——分子动力学模拟
1.3.5 蛋白质的结构稳定性——解旋自由能分析
1.4 酶在生物催化中的应用及酶催化性能改造策略
1.4.1 酶的概述
1.4.2 酶在生物催化中的应用
1.4.3 酶在生物催化中的应用瓶颈
1.4.4 酶的催化性能优化和改造策略
1.5 本研究思路及内容
第二章 基于计算模拟筛选的高效定向进化策略的研究
2.1 引言
2.2 实验材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 DNA片段合成
2.2.3 DNA重组文库构建
2.2.4 质粒构建
2.2.5单点突变
2.2.6 筛选培养基平板初筛
2.2.7 96孔板抗性测定
2.2.8 蛋白表达量测定
2.2.9 比酶活测定
2.2.10 突变结构稳定性分析
2.2.11 蛋白结构保守性分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 脂肪酶(BSLA)重组突变体离子液体抗性的定向进化
2.3.2 重组突变选点策略
2.3.3 计算筛选策略
2.4 本章小结
第三章 基于理性设计的多聚磷酸激酶体外ATP再生系统构建的研究
3.1 引言
3.2 实验材料和方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 质粒构建
3.2.3 定点突变
3.2.4 异源表达
3.2.5 多聚磷酸激酶酶活实验
3.2.6 多聚磷酸激酶与谷胱甘肽双功能酶的级联反应
3.2.7 多聚磷酸激酶与己糖激酶的级联反应
3.2.8 同源建模
3.2.9 分子对接
3.3 结果与讨论
3.3.1 低聚磷酸盐对多聚磷酸激酶PPK2(SMc02148)的底物抑制作用
3.3.2 多聚磷酸激酶PPK2(NCgl2620)的同源模型构建
3.3.3 低聚磷酸与多聚磷酸激酶PPK2(NCgl2620)的作用机理
3.3.4 构建以低聚磷酸为底物的体外ATP再生体系
3.4 本章小结
第四章 基于分子动力学模拟的糖类化合物与脂肪酶超分子构象研究
4.1 引言
4.2 实验材料和方法
4.2.1 实验部分
4.2.2 模拟计算部分
4.3 结果与讨论
4.3.1 脂肪酶(YLLIP2)口袋开放结构的获取
4.3.2 脂肪酶(YLLIP2)温度失活机理
4.3.3 脂肪酶(YLLIP2)溶剂失活机理
4.3.4 β-环糊精对脂肪酶(YLLIP2)热稳定性的影响
4.3.5 β-环糊精对脂肪酶(YLLIP2)甲醇耐受性的影响
4.3.6 葡萄糖对脂肪酶(YLLIP2)催化生产生物柴油的影响
4.3.7 葡萄糖对于脂肪酶(YLLIP2)甲醇耐受性作用的模拟分析及实验验证
4.4 本章小结
第五章 创新点
第六章 结论与建议
6.1 结论
6.2 建议
参考文献
致谢
研究成果及发表的学术论文
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