基于低温等离子体技术检测硒蛋白的研究

摘要

硒是一种对人类健康极为重要的微量营养物质，在人体内主要以硒蛋白的形式存在，具有抗氧化保护、细胞氧化还原平衡、预防癌症和其他疾病等多种功能和作用。由于生物样品的组成成分比较复杂，硒蛋白占总蛋白的比例非常小(＜10-5)，因此，建立高灵敏的硒蛋白分离检测方法十分具有挑战性并对开展硒蛋白组学研究具有非常重要的意义。
　　本论文建立了一种低温等离子体诱导化学蒸气发生的新型样品引入技术，该技术具有样品进样效率高、有效实现待测元素与复杂基质的分离、避免化学试剂使用、绿色经济等诸多优点。与高灵敏度的原子荧光光谱仪联用，建立了溶液中As、Te、Sb和Se含量的定量分析方法，完成了水系沉积物、紫菜和海带3种国家标准物质的方法学验证，成功应用于富硒酵母粉中总Se含量的测定。
　　基于该技术，本论文研制了一款用作Se含量测定的固体样品进样系统的实验设备。利用H2和He放电产生的氢等离子体诱导硒蛋白中硒元素的化学蒸气发生，建立了通过原子荧光光谱仪检测硒含量来间接定量硒蛋白的检测方法，成功完成了牛红细胞谷胱甘肽过氧化物酶的定量检测。同时，对富硒酵母水溶性蛋白提取液经电泳分离后转印，利用基于低温等离子体技术固体样品进样系统与原子荧光光谱仪的联用系统，对转印膜上蛋白条带进行扫描分析，从而实现了硒蛋白的空间分布分析研究。

目录

声明

摘要

符号和缩略词说明

第一章 绪论

1．1 硒蛋白及其检测的意义

1．2 硒蛋白检测技术的研究现状

1．2．1 酶活性检测法

1．2．2 同位素示踪法

1．2．3 等离子体质谱联用技术

1．3 化学蒸气发生技术

1．3．1 光化学蒸气发生

1．3．2 电化学蒸气发生

1．3．3 低温等离子体诱导化学蒸气发生

1．4 原子荧光光谱法

1．5 研究内容

第二章 低温等离子体诱导化学蒸气发生的研究

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 实验试剂与耗材

2．2．2 仪器与设备

2．2．3 样品制备

2．3 结果与讨论

2．3．1 低温等离子体诱导化学蒸气发生实验装置搭建

2．3．2 H2的作用

2．3．3 氢气流量优化

2．3．4 氩气流量优化

2．3．5 放电功率优化

2．3．6 原子化器观测高度优化

2．3．7 分析性能研究

2．3．8 方法学验证

2．3．9 实际应用

2．4 本章小结

第三章 基于低温等离子体技术固体样品进样系统的研制

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 实验试剂与耗材

3．2．2 实验仪器与设备

3．3 氢等离子体诱导固体样品表面元素化学蒸气发生的验证

3．3．1 实验装置

3．3．2 样品制备

3．3．3 氢等离子体的产生方式

3．3．4 氢等离子体作用

3．3．4 定量分析的可行性研究

3．4 基于低温等离子体技术固体样品进样系统的设计

3．5 基于低温等离子体技术固体样品进样系统的实施

3．5．1 控制软件编写和部件／零件加工

3．5．2样机的搭建

3．5．3 样机的改进

3．6 本章小结

第四章 基于低温等离子体技术检测硒蛋白的方法研究

4．1 引言

4．2 实验部分

4．2．1 实验试剂与耗材

4．2．2 仪器设备

4．3 硒蛋白定量分析方法研究

4．3．1 样品制备

4．3．2 实验装置

4．3．3 LTP探针尺寸选择

4．3．4 放电功率优化

4．3．5 气体流量优化

4．3．6 采样深度优化

4．3．7 原子化器观测高度优化

4．3．8 分析性能研究

4．3．8 实际样品应用

4．4 硒蛋白的空间分布研究

4．4．1 试剂配制

4．4．2 富硒酵母水溶性蛋白提取

4．4．3 蛋白电泳和转印

4．4．3 含硒蛋白的空间分布分析

4．5 本章小结

第五章 总结

参考文献

致谢

作者和导师简介