Insm1对胸腺髓质上皮细胞自身免疫耐受调控的作用研究

摘要

目的　　Insm1通常被认为是只在神经和内分泌细胞特异性表达的转录因子。有研究发现Insm1出现在调控自身免疫调节因子Aire的候选基因列表中，并且可能在Aire和Fezf2这两个基因区域与CTCF存在竞争性结合。这提示Insm1可能参与了一种全新的调控作用，即参与自身免疫耐受调控，可能改变我们一直以来对Insm1基因只在神经内分泌细胞表达的认识。本课题分别通过分析E18.5Insm1突变胸腺细胞组成变化，不同时期Insm1突变胸腺小鼠模型的自身免疫耐受表型，探讨Insm1是否对小鼠胸腺髓质上皮细胞自身免疫耐受调控发挥作用。　　方法　　(1)通过免疫荧光和流式细胞术分析E18.5Insm1突变小鼠胸腺中各细胞类型的比例变化。　　(2)分别构建E18.5Insm1突变小鼠胸腺移植裸鼠模型和胸腺特异性Insm1突变小鼠模型，通过流式细胞术、HE染色和免疫荧光染色，分析自身免疫耐受表型。　　结果　　(1)E18.5Insm1突变胸腺细胞组成变化：与Insm1+/lacz组相比，Insm1lacz/lacz组CD45+和CD45-细胞的比率没有显著差异,mTEChi以及mTEClo细胞的相对数量没有变化；Aire＋细胞在mTEChi细胞中的比例降低，Fezf2＋细胞在mTEChi以及mTEClo细胞中的比例均降低。　　(2)E18.5Insm1突变小鼠胸腺移植裸鼠模型自身免疫耐受表型分析：与HET/nu组相比，KO/nu组肾脏、唾液腺、肺、胰腺出现了淋巴细胞浸润现象，血清产生了针对皮脂腺、胰岛、下颌下腺的自身抗体。　　(3)成年期杂合背景的胸腺特异性Insm1突变模型初步分析：实验组和对照组小鼠外周组织均出现了淋巴细胞浸润现象，不过实验组部分小鼠外周组织淋巴细胞浸润程度明显较重。　　结论　　(1)Insm1突变减少了胚胎期胸腺中Aire与Fezf2的表达。　　(2)Insm1突变导致两种动物模型均出现了自身免疫炎症，并且可能与Aire、Fezf2有关。　　(3)Insm1参与了一种全新的调控作用，即参与胸腺髓质上皮细胞自身免疫耐受调控。

目录

声明

第一章 引言

1 T细胞成熟分化的胸腺机制简介

2 自身免疫耐受调控与胸腺髓质上皮细胞

3 TRAs调控因子Aire、Fezf2介绍

4 Insm1基因

5 Insm1基因新功能

6 研究的目的与意义

第二章 实验仪器、材料与方法

1 主要实验仪器

2 实验材料

2.1 实验动物

2.2 主要试剂

2.3主要溶液配制

3 实验方法

3.1 E18.5小鼠胸腺裸鼠肾被膜下移植模型构建

3.2 胸腺特异性 Insm1 突变小鼠模型建系繁育

3.3冰冻切片免疫荧光

3.4 基因工程小鼠基因型鉴定

3.5 E18.5胸腺髓质细胞磁珠分选（MACS）

3.6 石蜡切片组织HE染色

3.7 胸腺细胞流式细胞分析准备

3.8 小鼠心脏取血方法

第三章 结果

1 E18.5 Insm1突变胸腺细胞组成变化

2 E18.5 Insm1突变小鼠胸腺移植裸鼠模型自身免疫耐受表型

2.1 E18.5 Insm1突变小鼠胸腺裸鼠肾被膜下移植模型构建

2.2 移植Insm1突变小鼠胸腺裸鼠模型T细胞发生了分化

2.3 Insm1突变胸腺移植裸鼠模型器官出现淋巴细胞浸润

2.4 移植Insm1突变小鼠胸腺裸鼠模型血清中出现了自身免疫抗体

3 杂合背景胸腺特异性Insm1突变小鼠模型自身免疫耐受表型初步分析

第四章 讨论

第五章 结论

第六章 展望

参考文献

英文缩略词表

硕士期间发表论文

致谢