奶牛乳腺上皮细胞中SCAP蛋白对SREBP1调控SCD基因表达的作用研究

摘要

旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)蛋白调控硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)基因表达的影响.通过在奶牛乳腺上皮细胞中转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理因素,采用双荧光素酶报告基因系统和荧光定量PCR技术研究对SCD基因表达及启动子活性的调控作用,免疫荧光技术观察对于SREBP1在细胞核表达的影响,结果表明与转染pcDNA3.1空载体的对照组相比,SCAP组对PGL3-SCD3启动子活性无影响,SREBP1组和SCAP+SREBP1组启动子活性值显著增加(p＜0.05),并且两组之间启动子活性值相比也达到差异显著(p＜0.01);乳腺上皮细胞转染0.1ug、0.5ug和1.0ug SCAP质粒发现,SCAP的剂量与PGL3-SCD3的启动子活性具有显著的量效关系(P＜0.01);激光共聚焦观察发现在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增加SREBP1在细胞核的表达;基因表达检测发现,与对照组相比,SREBP1处理后SCD基因mRNA的表达显著上调1.23倍(P＜0.05),SCAP+SREBP1处理后SCD的表达显著上调1.54倍(P＜0.01).本研究揭示奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对靶基因SCD的转录激活作用.