基于治疗药物监测和转运体基因多态性研究胃肠道间质瘤患者伊马替尼疗效和安全性

摘要

目的：鉴于在胃肠道间质瘤(Gastrointestinal Stromal Tumour，GIST)患者中开展血浆伊马替尼浓度监测还不是临床常规治疗药物监测(Therapeutic drug monitoring，TDM)项目，本研究对长期接受伊马替尼治疗的GIST患者进行血浆药物浓度测定，结合伊马替尼转运体基因多态性的检测，综合分析患者血浆伊马替尼稳态浓度与临床治疗效果及不良反应的关系，探讨在我国GIST患者中常规开展伊马替尼TDM的价值和意义，以期个性化地为伊马替尼的临床剂量调整提供参考依据。　　方法：对在广州某医院接受伊马替尼治疗的GIST患者进行观察性研究，患者特征，肿瘤治疗过程及各项检查指标结果来自医院的病历记录。稳态血浆伊马替尼谷浓度通过高效液相色谱法(HPLC)测定，伊马替尼转运体基因各研究位点的基因分型通过Sanger法测定。主要分析的内容有：GIST患者伊马替尼剂量与谷浓度的相关性，血浆伊马替尼浓度与临床治疗效果和不良反应(ADR)相关性，并探索转运体蛋白基因SLC22A1-rs683369，SLC22A1-rs628031，ABCB1-rs3842和ABCG2-rs2231142的多态性对血浆伊马替尼浓度的影响。　　结果：共66名GIST患者参与了本研究，患者平均接受伊马替尼治疗的时间为23.2个月，大多数患者(65.2％)服用伊马替尼的剂量为400mg。患者平均血浆伊马替尼谷浓度为2551ng/mL，最低谷浓度为517ng/mL，最高谷浓度为6121ng/mL。　　(1)伊马替尼的服用剂量与患者血浆药物谷浓度的关系分析结果显示：服用300mg，400mg及600mg的患者血浆伊马替尼谷浓度的中位数(上、下四分位数)分别为：1173(854 , 1388)ng/mL，2314(1913 , 2649)ng/mL和4181(3383 , 4795)ng/mL，浓度组间分布存在显著的统计学差异(P<0.05)。　　(2)血浆伊马替尼谷浓度与患者治疗反应的相关性分析结果显示：在41例伊马替尼姑息治疗的患者中，无治疗反应的患者血浆伊马替尼谷浓度的中位数(上、下四分位数)为2233(1076 , 3074)ng/mL，有反应者的谷浓度的中位数(上、下四分位数)为2352(1635 , 3184)ng/mL，有反应患者与无反应患者之间血浆伊马替尼谷浓度无统计学差异(P=0.22)。(3)血浆伊马替尼谷浓度与疾病进展时间的相关性分析结果显示：姑息治疗的患者服用伊马替尼的中位时间为25个月，血浆伊马替尼谷浓度<2000ng/mL的患者的中位无进展生存期(Progression-free survival, PFS)为47个月，血浆伊马替尼谷浓度≥2000ng/mL的患者的中位PFS为43个月，单变量Cox回归分析显示，这两个浓度组患者之间的PFS差异无统计学意义(P>0.05)，但血浆伊马替尼谷浓度<1600ng/mL的患者的PFS比浓度≥1600ng/mL患者的PFS显著更短(P=0.034)。　　(4)血浆伊马替尼谷浓度与药物毒副作用的相关性分析结果显示：纳入的患者所发生的ADR大部分属于Ⅰ–Ⅱ级，无患者出现严重威胁生命的ADR。发生率最高的是水肿和水钠潴留(48.5%)，其次为骨髓抑制(39.4%)。Spearman相关分析结果表明，与血浆伊马替尼谷浓度显著相关的ADR有骨髓抑制(P=0.040)，肌痛及肌痉挛(P=0.046)，水肿和水钠潴留(P=0.035)，呕吐(P=0.048)。进一步每两组间的非参数检验结果表明，血浆伊马替尼谷浓度≥4000ng/mL的患者浓度相关的ADR发生率显著高于血浆伊马替尼谷浓度<4000ng/mL的患者。　　(5)基因多态性对血浆伊马替尼谷浓度的影响分析结果显示：①伊马替尼靶蛋白基因：KIT第11外显子突变、KIT第9外显子突变、PDGFRA突变、既无KIT也无PDGFRA突变(即野生型)的患者总体的血浆伊马替尼谷浓度有显著的统计学差异(P<0.01)。其中，KIT第11外显子突变、PDGFRA突变患者的血浆伊马替尼谷浓度较高；而KIT第9外显子突变和野生型的患者血浆伊马替尼谷浓度较低。②伊马替尼转运体基因：流入转运蛋白基因SLC22A1-rs683369、SLC22A1-rs628031的野生基因携带者(野生型+杂合子)的血浆伊马替尼谷浓度显著较低，流出转运蛋白基因ABCG2-rs2231142的野生基因型患者的血浆伊马替尼谷浓度显著更低，而ABCB1-rs3842的基因多态性对血浆伊马替尼谷浓度无影响。　　结论：(1)使GIST患者的稳态血浆伊马替尼谷浓度控制在1600ng/mL~4000ng/mL可能获得较好的治疗效果和较低的ADR风险。(2 )伊马替尼转运体基因SLC22A1-rs683369，SLC22A1-rs628031和ABCG2-rs2231142的多态性对血浆伊马替尼浓度可能有影响；ABCB1-rs3842的基因多态性对血浆伊马替尼浓度可能无影响。(3)伊马替尼TDM和转运体基因多态性分析能为剂量调整提供依据，有助于优化GIST治疗结局，在长期接受伊马替尼治疗的GIST患者中常规开展TDM有明显的临床获益。

目录

声明

英文缩写对照表

1.1胃肠道间质瘤的定义、分类及流行病学特点

1.2伊马替尼在GIST治疗中的应用

1.3伊马替尼在GIST治疗中的药代动力学特点

1.3.1伊马替尼的转运机制

1.3.2伊马替尼的代谢途径

1.4伊马替尼在GIST治疗中的药效学特点

1.4.1伊马替尼的治疗效果

1.4.2伊马替尼的安全性

1.5基因多态性对GIST治疗的影响

1.5.1伊马替尼的药代动力学相关蛋白或酶基因SNP

1.5.2伊马替尼的药效学相关蛋白或酶基因SNP

1.6血浆伊马替尼浓度监测在GIST治疗中的意义

1.7研究目的及意义

2.1研究对象与实验器材

2.1.1研究对象

2.1.2实验器材

2.2全血标本采集及预处理

2.3伊马替尼浓度测定方法学的建立与验证

2.4伊马替尼浓度测定方法学的验证结果

2.4.1专属性

2.4.2标准曲线及最低检测限

2.4.4提取回收率

2.4.5稳定性

2.5患者血浆伊马替尼谷浓度的测定及其结果

3.1患者临床信息的采集

3.2患者基本特征

3.3统计分析方法

3.4伊马替尼的服用剂量与患者血浆药物谷浓度的相关性

3.5血浆伊马替尼谷浓度与疾病进展时间的相关性

3.6血浆伊马替尼谷浓度与患者治疗反应的相关性

3.7血浆伊马替尼谷浓度与药物毒副作用的相关性

4.1伊马替尼靶蛋白基因多态性对血浆伊马替尼谷浓度的影响

4.2伊马替尼转运体基因多态性检测方法

4.2.1基因组DNA提取步骤

4.2.2 DNA浓度测定

4.2.3选取目的基因位点

4.2.4设计扩增引物

4.2.5扩增目的基因

4.2.6 PCR产物的纯化回收

4.2.7基因测序

4.2.8实验中采用的分析软件及查询信息使用的电子数据库

4.3伊马替尼转运体基因多态性检测结果

4.3.1各位点基因型频率

4.3.2 Hardy-Weinberg检验

4.3.3测序峰图

4.4伊马替尼转运体基因多态性与血浆伊马替尼谷浓度的相关性

4.4.1流入转运蛋白SLC22A1基因多态性与血浆伊马替尼谷浓度的相关性

4.4.2流出转运蛋白ABCB1基因多态性与血浆伊马替尼谷浓度的相关性

4.4.3流出转运蛋白ABCG2基因多态性与血浆伊马替尼谷浓度的相关性

第五章 讨论与结论

参考文献

硕士期间发表论文

致谢