马来甜龙竹芽尖再生体系的建立及转基因研究

摘要

本研究以马来甜龙竹芽尖为试验材料，研究了芽尖愈伤组织诱导、分化和再生苗根诱导的适宜培养基和驯化移栽条件，建立其高效稳定的再生体系。根据其再生体系，对马来甜龙竹的遗传转化条件进行了探索，为竹子遗传改良打下基础。主要研究结果如下:　　1、马来甜龙竹芽尖再生体系的建立　　(1)愈伤组织诱导的较合适的培养基为添加有3mg·L-12，4-D和(0.5-1)mg·L-1NAA的MS培养基，致密颗粒状愈伤组织诱导率达61.7％;　　(2)弱光(10μmol·m-2·s-1)处理对愈伤组织分化影响较大，较适宜的处理时间为6天。较合适的分化培养基为添加有1mg·L-16-BA、1mg·L-1KT和0.25mg·L-1NAA的MS培养基，分化率达46.67％,再生植株伸长生长良好;　　(3)较适宜的生根培养基为添加有3mg·L-1IBA的1/2MS培养基，生根率为55％，根较粗，其中部分根长有侧根;移栽至混合基质(蛭石∶珍珠岩∶泥炭=1∶1∶1)中，成活率为83.33％。　　2、农杆菌介导的马来甜龙竹遗传转化的研究　　以马来甜龙竹芽尖愈伤组织为受体，通过农杆菌介导法将抗寒基因CodA转入愈伤组织中，并对共培养时间、潮霉素选择压进行了优化，结果表明共培养3天后，经过20mg·L-1、40mg·L-1潮霉素浓度梯度筛选，抗性愈伤组织率较高达51.9％。通过分化得到10株抗性植株，其中1株较大的再生植株PCR检测呈阳性。　　通过农杆菌介导法将玉米中与花青素合成相关的调节基因（Lc基因）转入马来甜龙竹芽尖愈伤组织中，经潮霉素筛选后转移到分化培养，成功获得1株紫色抗性再生植株和1块紫色抗性愈伤组织。　　3、基因枪介导的马来甜龙竹遗传转化体系初探　　采用基因枪介导法，并将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)基因导入马来甜龙竹芽尖愈伤组织中，经3天恢复培养可观察到少量绿色荧光圆点。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

1 植物愈伤组织诱导及再生体系的建立

1．1 禾谷类植物芽尖愈伤组织诱导及再生体系的建立

1．2 竹子愈伤组织诱导及再生体系的建立

2 农杆菌介导的植物转基因研究现状

2．1 禾谷类植物转基因研究

2．2 竹子转基因研究

3 基因枪法在植物遗传转化中的的研究现状

4 竹子愈伤组织诱导及再生体系的应用前景和存在的问题

4．1 竹子愈伤组织诱导及再生体系的应用前景

4．2 存在问题

5 本研究的意义

第二章 马来甜龙竹芽尖再生体系的建立

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 不同植物激素及有机添加物对芽尖愈伤组织诱导的影响

1．3 不同激素组合及弱光预处理对愈伤组织分化的影响

1．4 愈伤组织的组织细胞学观察

1．5 生根与驯化移栽

1．6 培养条件与数据统计分析

2 结果与分析

2．1 不同浓度2，4-D对芽尖愈伤组织诱导的影响

2．2 不同浓度6-BA对芽尖愈伤组织诱导的影响

2．3 不同浓度NAA对芽尖愈伤组织诱导的影响

2．4 不同有机添加物对愈伤组织诱导的影响

2．5 不同植物激素组合及弱光处理对愈伤组织分化的影响

2．6 愈伤组织的组织细胞学观察

2．7 不同浓度IBA对再生苗生根诱导的影响

2．8 再生苗的驯化与移栽

3 讨论

4 结论

第三章 农杆菌介导的马来甜龙竹遗传转化研究

1 材料与方法

1．1 转化受体材料

1．2 农杆菌与质粒

1．3 潮霉素选择压的筛选

1．4 遗传转化过程中的培养基

1．5 根癌农杆菌介导马来甜龙竹芽尖愈伤组织遗传转化

1．6 转CodA基因植株的PCR分子鉴定

2 结果与分析

2．1 潮霉素选择压的筛选

2．2 共培养时间对愈伤组织转化的影响

2．3 转CodA基因植株的PCR检测

3 讨论

4 结论

第四章 基因枪介导的马来甜龙竹遗传转化研究

1 材料与方法

1．1 转化受体材料

1．2 大肠杆菌与质粒

1．3 基因枪转化过程中的培养基

1．4 基因枪转化马来甜龙竹芽尖愈伤组织

1．5 数据统计分析

2 结果与分析

2．2 蔗糖或甘露醇高渗处理对分化率的影响

2．3 恢复培养阶段不同蔗糖浓度对分化培养的影响

3 讨论

4 结论

参考文献

附图

附录

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