Cdc14A在小鼠一细胞期受精卵G2/M期转换中的作用研究

目录

声明

前言

1.实验材料

1.1实验动物

1.2质粒、菌株及相关分子生物学试剂

1.3主要的实验仪器设备

1.4主要试剂配制

2. 实验方法

2.1 小鼠一细胞期受精卵的收集和培育

2.2 表达载体的构建及鉴定

2.2.1 PCR扩增目的基因

2.2.2 目的片段和载体双酶切

2.2.3 目段片段与载体连接

2.2.4 连接产物的转化

2.2.5 用质粒小提试剂盒提取质粒

2.2.6质粒酶切鉴定

2.3显微注射Cdc14A-MO并观察对受精卵卵裂率的影响

2.4间接免疫荧光实验观察内源性Cdc14A和Cdc25B蛋白的亚细胞定位

2.5 细胞培养和细胞转染

2.6细胞裂解，免疫沉淀和免疫印迹

2.7 数据处理

3.结果

3.1 双酶切鉴定真核表达载体构建成功

3.2 显微注射Cdc14A-MO观察对小鼠一细胞期受精卵发育的影响

3.2.1 显微注射Cdc14A-MO后24h Cdc14A mRNA相对表达含量水平的检测

3.2.2 显微注射Cdc14A-MO后24h Cdc14A蛋白表达水平的检测

3.2.3 对小鼠一细胞期受精卵卵裂率的影响

3.2.4 相差显微镜下受精卵形态观察

3.3 间接免疫荧光观察内源性的Cdc14A和Cdc25B的亚细胞定位

3.4 免疫共沉淀测定Cdc14A 和 Cdc25B的相互作用

4. 讨论

5.结论

6.展望

参考文献

文献综述:Cdc14与Cdc25相互作用的研究进展

参考文献

缩 略 语 表

攻读学位期间发表文章情况

个 人 简 历

致谢