蛋白激酶Pkmyt1对小鼠1-细胞期受精卵发育的抑制作用

摘要

目的:通过在小鼠1-细胞期受精卵内过表达Pkmyt1-wild type(WT)(野生型)mRNAs,研究蛋白激酶Pkmyt1对小鼠受精卵早期发育的影响,为进一步阐明Pkmyt1对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制奠定基础.方法:构建pcDNA3.1/myc-Pkmyt1-WT质粒.超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组和Pkmyt1-WT mRNAs注射组,收集各组卵细胞后采用Western blotting法检测Pkmyt1蛋白表达和Cdc2-pTyr 15磷酸化状态;相差显微镜观察受精卵的形态变化并计数卵裂率.结果:pcDNA3.1/myc-Pkmyt1-WT质粒构建成功.与未注射组(0.414±0.016)和TE缓冲液注射组(0.441±0.013)比较,受精卵显微注射Pkmyt1-WT mRNAs 4 h后,Pkmyt1蛋白表达水平(1.112±0.025)增高(P＜0.01).与未注射组(60.81％±3.27％)和TE缓冲液注射组(61.79％±4.08％)比较,Pkmyt1-WT-mRNA注射组卵裂率(34.2％±3.25％)显著降低(P＜0.01).Pkmyt1-WT mRNA注射组在注射hCG后29.0 h检测到微弱的磷酸化信号,29.5h检测不到任何磷酸化信号.结论:Pkmyt1过表达后磷酸化Cdc2-pTyr15可抑制小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,提示Pkmyt1负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程.