辣椒素对慢性应激大鼠胃动力的作用及机制的研究

摘要

目的：通过研究不同剂量、不同作用时间的辣椒素（Capsaicin，Cap）对慢性应激性(Chronic unpredictable mild stress，CUMS）大鼠胃酚红排空率的影响，并检测胃窦组织的及脑组织辣椒素受体（transient receptor potential vanilloid subtype1，TRPV1）、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide，CGRP)、神经降压素（Neurotensin，NT）的表达以及血清胃动素（motilin，MTL）水平，探讨Cap对慢性应激大鼠胃动力的作用及机制。　　方法：　　1.实验动物及分组：SD大鼠120只，随机抽取20只作为正常对照组（A组），SD大鼠100只建立CUMS模型。造模成功后，将其随机分为空白对照组（B组）、溶剂对照组（C组）、Cap0.04mg/kg组（D组）、Cap0.4mg/kg组（E组）、Cap4mg/kg组（F组），每组各20只。为了探索不同时期Cap对CUMS大鼠胃动力的影响，将实验分为I期、II期，I期为1周，II期为2周。按相应时期，A组、B组、C组、D组、E组、F组随机分为2个小组，即I期分为A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组（Cap1周），II期分为A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组（Cap2周），每组SD大鼠10只。　　2.CUMS模型的建立：SD大鼠20只，随机分成正常组、模型组各10只。正常组自由进食进水，连续3w。模型组每天随机安排一种刺激，包括:禁水、禁食、夹尾、水平摇晃、冰水游泳、热水游泳、转换昼夜节律、制动、潮湿垫料，相邻2d的刺激不重复，每种刺激重复2-3次，连续3w。　　3.Cap制剂的配制：称取Cap100mg（98.37％的Cap粉末101.66mg）、Cap10mg（98.37%的Cap粉末10.17mg）、Cap1mg（98.37%的Cap粉末1.02mg），分别加入含1ml吐温80的生理盐水99ml中混匀后，配成浓度为1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml的Cap制剂。对照溶剂：1ml吐温80加入99ml生理盐水中混匀配成溶剂。　　4.Cap干预实验方法：造模完成后，每日给予各组大鼠不同溶液，A组无处理，B组蒸馏水灌胃，C组给予对照溶剂灌胃，D组Cap0.04mg/kg灌胃，E组Cap0.4mg/kg灌胃、F组Cap4mg/kg灌胃，给药后所有大鼠常规喂养，各组大鼠按分期喂养后，所有大鼠禁食24h，于翌日晨给予浓度为50mg/dL的酚红溶液2ml/鼠灌胃，30min后麻醉处死大鼠。　　5.检测指标：①收集胃内容物，测定胃酚红排空率。②心脏取血2ml，4℃离心后提取上清液，用Elisa法检测血浆MTL水平。③显微镜下观察大鼠胃粘膜损伤情况并进行病理组织学评分。④取胃窦、脑组织后分别用Elisa和免疫组化方法检测TRPV1、CGRP、NT的表达。　　结果：　　1、模型验证：　　（1）动物一般情况：正常组大鼠一般状况良好，活动灵敏，进食进水正常，大小便正常；CUMS模型组大鼠精神状态较差，消瘦萎靡，倦怠懒动，毛发污浊，进食进水减少，大便干结量少。　　（2）胃酚红排空率：正常组与CUMS模型组胃酚红排空率分别为80.36%±3.27%、65.83%±3.90%，CUMS模型组的胃酚红排空率显著低于正常组（P<0.05），造模成功。　　2. Cap干预的结果：　　（1）动物一般情况：实验过程中各组大鼠无死亡，其中A1组、A2组大鼠一般状况良好，活动灵敏，进食进水正常，大小便正常；B1组、C1组、B2组、C2组大鼠精神状态较差，消瘦萎靡，倦怠懒动，毛发污浊，进食进水减少，大便干结量少。D1组、E1组、F1组大鼠一般精神状态较差，消瘦萎靡，倦怠懒动，毛发污浊，进食进水减少，大便干结量少。D2组大鼠一般状况稍好，活动稍迟缓，消瘦，进食进水正常，大小便正常。E2组大鼠一般状况稍好，活动稍迟缓，消瘦，进食进水正常，大小便正常。F2组一般状况欠佳，活动迟缓，消瘦，进食进水正常，大小便正常。　　（2）大鼠胃酚红排空率：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为79.54%±2.98%、69.37%±4.21%、68.15%±3.67%、65.58%±7.50%、66.58%±5.31%、62.52%±5.34%；A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为78.61%±4.04%、67.14%±3.44%、66.95%±3.93%、92.68%±2.31%、86.24%±2.75%、79.53%±2.24%。其中在 I期实验中，A1组胃酚红排空率显著高于该期其余各组（P<0.05）,其余各组相比较差异无统计学意义（P>0.05）。在II期实验中，D2组、E2组、F2组胃酚红排空率显著高于B2组、C2组（P<0.05），且D2组胃酚红排空率显著高于E2组（P<0.05），E2组胃酚红排空率显著高于F2组（P<0.05）。在相同Cap剂量下D2组显著高于D1组（P<0.05）,E2组显著高于E1组（P<0.05）， F2组显著高于 F1组（P<0.05）。　　（3）ELISA法检测结果：①胃窦组织TRPV1表达结果：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为63.62±9.45pg/ml、269.38±11.07pg/ml、274.67±10.92pg/ml、138.16±12.10pg/ml、147.60±15.18pg/ml、150.62±11.95pg/ml，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为59.42±7.05pg/ml、273.06±13.98pg/ml、271.57±11.59pg/ml、73.89±6.53pg/ml、99.50±5.94pg/ml、130.44±7.63pg/ml。其中在I期中，A1组显著低于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组显著低于B1组、C1组（P<0.05），而D1组、E1组、F1组之间相比较差异无统计学意义（P>0.05）。在II期中，A2组显著低于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组显著低于B2组、C2组（P<0.05），且D2组显著低于E2组（P<0.05），E2组显著低于F2组（P<0.05）。在相同Cap剂量下D1组显著高于D2组（P<0.05）,E1组显著高于E2组（P<0.05），F1组显著高于F2组（P<0.05）。②下丘脑组织TRPV1表达结果：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为61.67±6.74pg/ml、284.06±6.88pg/ml、288.01±9.76pg/ml、154.48±8.53pg/ml、159.48±10.14pg/ml、151.77+13.25pg/ml，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为64.20±6.14pg/ml、284.50±5.45pg/ml、285.71±8.48pg/ml、78.52±6.31pg/ml、108.21±4.27pg/ml、132.26±4.19pg/ml。其中在I期，A1组显著低于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组显著低于B1组、C1组（P<0.05），而 D1组、E1组、F1组之间相比较差异无统计学意义（P>0.05）。在II期中，A2组显著低于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组显著低于B2组、C2组（P<0.05），且D2组显著低于E2组（P<0.05），E2组显著低于F2组（P<0.05）。在相同Cap剂量下D1组显著高于D2组（P<0.05）,E1组显著高于E2组（P<0.05），F1组显著高于F2组（P<0.05）。③胃窦组织CGRP表达结果：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为80.16±7.43pg/ml、218.66±10.24pg/ml、224.13±11.60pg/ml、110.37±8.90pg/ml、164.97±14.52pg/ml、197.67±10.04pg/ml，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为84.01±6.58pg/ml、220.79±9.71pg/ml、223.04±12.01pg/ml、110.79±8.74pg/ml、143.21±9.20pg/ml、182.93±9.31pg/ml。其中在I期，A1组显著低于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组显著低于B1组、C1组（P<0.05），且D1组显著低于E1组（P<0.05），E1组显著低于F1组（P<0.05）。在II期中，A2组显著低于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组显著低于B2组、C2组（P<0.05），且D2组显著低于E2组（P<0.05），E2组显著低于F2组（P<0.05）。在相同Cap剂量下E1组显著高于E2组（P<0.05），F1组显著高于F2组（P<0.05）。④下丘脑组织CGRP表达结果：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为78.14±9.34pg/ml、219.64±9.28pg/ml、227.55±6.56pg/ml、109.88±7.29pg/ml、174.64±8.23pg/ml、206.78±6.81pg/ml，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为82.69±7.22pg/ml、224.64±9.66pg/ml、232.55±4.97pg/ml、106.07±8.42pg/ml、156.79±5.39pg/ml、176.41±8.60pg/ml。在 I期中，A1组显著低于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组显著低于B1组、C1组（P<0.05），且D1组显著低于E1组（P<0.05），E1组显著低于F1组（P<0.05）。在II期中，A2组显著低于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组显著低于B2组、C2组（P<0.05），且D2组显著低于E2组（P<0.05），E2组显著低于F2组（P<0.05）。在相同Cap剂量下E1组显著高于 E2组（P<0.05），F1组显著高于 F2组（P<0.05）。⑤胃窦组织NT表达结果：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为78.35±7.73pg/ml、247.40±8.25pg/ml、256.21±9.36pg/ml、108.72±10.18pg/ml、146.03±12.65pg/ml、170.56±8.08pg/ml，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为82.08±8.09pg/ml、243.80±6.44pg/ml、251.41±7.33pg/ml、107.93±8.43pg/ml、136.13±7.73pg/ml、174.40±7.04pg/ml。在 I期中，A1组显著低于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组显著低于B1组、C1组（P<0.05），且D1组显著低于E1组（P<0.05），E1组显著低于F1组（P<0.05）。在II期中，A2组显著低于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组显著低于B2组、C2组（P<0.05），且D2组显著低于E2组（P<0.05），E2组显著低于F2组（P<0.05）。⑥下丘脑组织NT表达结果：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为91.59±7.79pg/ml、258.62±6.42pg/ml、261.42±8.08pg/ml、107.29±4.73pg/ml、134.40±8.74pg/ml、183.06±6.11pg/ml，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为91.09±6.28pg/ml、262.89±6.37pg/ml、264.68±7.38pg/ml、111.38±2.94pg/ml、146.48±4.19pg/ml、190.67±3.75pg/ml。在 I期 A1组显著低于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组显著低于B1组、C1组（P<0.05），且D1组显著低于E1组（P<0.05），E1组显著低于F1组（P<0.05）。在II期中A2组显著低于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组显著低于B2组、C2组（P<0.05），且D2组显著低于E2组（P<0.05），E2组显著低于F2组（P<0.05）。　　（4）大鼠血浆MTL水平：A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为169.44±8.07pg/ml、71.73±8.54pg/ml、73.30±9.67pg/ml、115.46±9.96pg/ml、114.64±10.61pg/ml、105.27±9.23pg/ml， A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为172.68±7.49pg/ml、75.48±10.03pg/ml、69.22±8.92pg/ml、152.93±5.66pg/ml、135.67±11.92pg/ml、130.34±12.84pg/ml。在 I期实验中，A1组 MTL水平明显高于其余各组（P<0.05），D1组、E1组、F1组均高于B1组、C1组（P<0.05），且D1组、E1组MTL水平明显高于F1组（P<0.05），而D1组与E1组相比较差异无统计学意义（P>0.05）。在II期实验中，A2组MTL水平明显高于其余各组（P<0.05），D2组、E2组、F2组均高于B2组、C2组（P<0.05），且D2组MTL显著高于E2组（P<0.05），E2与F2组相比较差异无统计学意义（P>0.05）。在相同Cap剂量下D1组显著低于D2组（P<0.05）,E1组显著低于E2组（P<0.05），F1组显著低于F2组（P<0.05）。　　（5）胃粘膜病理组织学检查：胃粘膜病理组织损伤积分（Masuda标准方法）A1组、B1组、C1组、D1组、E1组、F1组分别为0.5±0.71、4.7±1.50、4.3±1.33、4.2±1.03、3.8±0.92、4.0±1.41，A2组、B2组、C2组、D2组、E2组、F2组分别为0.3±0.48、4.1±1.45、4.5±1.35、2.1±0.74、2.5±0.85、2.4±0.84。在I期实验中，A1组显著低于其余各组（P<0.05），其余各组之间相比较差异无统计学意义（P>0.05）。在II期实验中，A2组显著低于其余各组。D2组、E2组、F2组显著低于B2、C2组（P<0.05），D2组、E2组、F2组之间相比较差异无统计学意义（P>0.05）。而在相同Cap剂量下，D1组显著高于D2组（P<0.05），E1组显著高于E2组（P<0.05），F1组显著高于F2组（P<0.05）。　　结论：　　1.CUMS能成功建立大鼠胃动力障碍模型，且能上调TRPV1的表达。　　2.CUMS大鼠摄入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d) Cap1周对其胃动力无促进作用。　　3.CUMS大鼠摄入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d) Cap2周对其胃动力有明显促进作用，以0.04mg/(kg·d)效果最佳。　　4.短期（1周及2周）摄入不同剂量Cap可使CUMS大鼠上调的TRPV1表达下移，并调节CGRP、NT脑肠肽的表达，促进MTL的释放。　　5.CUMS大鼠摄入0.04mg/(kg·d)-4mg/(kg·d) Cap对胃粘膜有保护作用。

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 模型验证

2 Cap干预实验结果

讨论

1 胃动力障碍模型

2 Cap与FGIDs

3 Cap与胃动力

4 Cap对胃肠动力的作用机制

5 Cap对胃粘膜的影响

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:辣椒素对胃肠道肿瘤的抗癌活性

声明