L-精氨酸对人肺腺癌A549增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

摘要

目的：研究L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)干预人肺腺癌细胞A549后，L-精氨酸对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡以及PI3K/Akt信号通路的影响，探讨L-精氨酸对人肺腺癌细胞株A549抗肿瘤的机制。　　方法：用不同浓度的L-精氨酸(0，16，32，64，96，128 mmol/L)分别处理体外培养的人肺腺癌A549细胞，作用时间为24、36和48小时，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测细胞增殖抑制率变化;利用显微镜观察细胞在L-精氨酸作用下的形态变化;同时采用流式细胞仪检测肿瘤细胞在0，16，32，64，96 mmol/L浓度下，48小时的细胞凋亡率及细胞周期进程;Westernblot检测各浓度组人肺腺癌A549细胞PI3K/Akt(phosphatidylinositol-3-kinases/Akt，PI3K/Akt)信号通路活化状态，检测Akt及其serine473位点(p-Akt S473)的磷酸化情况;进一步检测该通路下游促凋亡蛋白Bad和Cleaved Caspase-3的表达情况。　　结果：⑴在0～128mmol/L的范围内，L-精氨酸能显著地抑制细胞增殖，其效果与作用浓度及时间有关，差异有统计学意义（1.00 vs0.58±0.07，P＜0.05），高浓度的L-精氨酸表现出一定的细胞毒性；⑵显微镜结果显示，与对照组比较，随着L-精氨酸浓度的增高，细胞数目降低，细胞形态变得不规则；⑶与对照组比较，高浓度的L-精氨酸处理细胞48小时可以显著地增加细胞的凋亡率，阻滞细胞周期在G0/G1期（0.70±0.15％ vs21.40±4.69％，P＜0.01;40.54±6.14％ vs65.57±8.24，P＜0.01），S期及G2/M期细胞比例降低，细胞增殖能力受到抑制;⑷Western blot结果显示，随着L-精氨酸浓度的增高（0，16，32，64，96 mmol/L），p-Akt S473磷酸化程度降低(P＜0.05);与对照组比较，96mmol/L L-精氨酸作用下对p-Akt S473磷酸化抑制作用最强（1.00±0.08 vs0.32±0.06，P＜0.01）;而与之相反的，随着L-精氨酸浓度的增高，L-精氨酸增加促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3和Bad表达(1.00±0.07vs2.99±0.28，P＜0.01;1.00±0.17 vs2.98±0.31，P＜0.01)，提示高浓度L-精氨酸可激活凋亡相关通路，提高相关促凋亡蛋白的表达来抑制人肺腺癌细胞株A549细胞增殖。　　结论：L-精氨酸能抑制人肺腺癌A549增殖及促进凋亡，该作用可能是通过抑制P13K/Akt信号通路激活来实现。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 MTT法检测L-精氨酸对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

2 L-精氨酸对人肺腺癌A549细胞形态的影响

3 L-精氨酸对人肺A549细胞凋亡率的影响

4 L-精氨酸对人肺腺癌A549细胞周期进程的影响

5 Westem Blot检测人肺腺癌A549细胞内Cleaved Caspase-3，Bad，Akt，p-Akt蛋白表达水平

讨论

1．L-精氨酸抑制人肺腺癌A549细胞增殖作用

2．L-精氨酸促进人肺腺癌A5499m胞凋亡、抑制细胞周期进展，降低A549细胞增殖

3．L-精氨酸增加人肺腺癌A549细胞中促凋亡蛋白Bad及Cleaved Caspase-3表达，促进A549细胞凋亡

4．L-精氨酸抑制PI3K／Akt信号通路的激活

5．总结

结论

参考文献

英汉缩略语名词对照

致谢

精氨酸剥夺在恶性肿瘤治疗中的研究进展 综述

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