SCCmec伴随基因psM-mec与血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力及耐药性的相关性研究

摘要

目的:　　人葡萄球菌是引起血流感染的重要病原菌，分离率逐年增高，耐药性强、易产生物被膜，临床治疗十分棘手，引起医学界广泛关注。本文旨在通过研究血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力、耐药性特点，分析psm-mec基因与生物被膜形成能力和耐药性之间的相关性，为人葡萄球菌感染的防治提供依据。　　方法:　　1.收集血液来源经全自动微生物分析系统鉴定的人葡萄球菌。　　2.采用琼脂稀释法检测血液来源人葡萄球菌对16种抗菌药物的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration，MIC)，通过PCR扩增mecA基因准确验证和区分耐甲氧西林人葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcushominis，MRSHo）和甲氧西林敏感人葡萄球菌（methicillin-susceptiveStaphylococcus hominis，MSSHo），比较二者在耐药谱上的差异。　　3.半定量粘附实验(Microtite Plate Assay, TCP)检测血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力，分析生物被膜组与非生物被膜组菌株在耐药谱上的差异。　　4.PCR初筛携带psm-mec基因菌株，扩增fudoh基因和DNA测序验证psm-mec检测结果，分析psm-mec基因与生物被膜形成能力和耐药性之间的相关性。　　5.PCR扩增mecR1/psm-mec与psm-mec/xylR基因间隔序列，探究psm-mec基因在SCCmec上的定位特点。　　6.多重PCR法对携带psm-mec基因菌株SCCmec分型，了解其SCCmec的分型情况。　　7.采用多重PCR分别检测携带psm-mec基因菌株的mec与ccr型别，分析其SCCmec的构成特点。　　结果:　　1.收集血液来源人葡萄球菌共55株。　　2.药敏试验显示，55株血液来源人葡萄球菌对利奈唑胺、呋喃妥因、普丁/达福、万古霉素和替加环素五种抗菌药物全部敏感，对苯唑西林、青霉素、红霉素、复方新诺明、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四环素、利福平和庆大霉素的耐药率分别为85.45％、92.73％、87.27％、65.45％、67.27％、47.27％、47.27％、34.55％、41.82％、16.36％和10.91％。　　3.55株血液来源人葡萄球菌中，46(83.64％)株为MRSHo，其中45株mecA基因阳性，1株阴性，其余9(16.36％)株为MSSHo，均未检出mecA基因。MRSHo对环丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、四环素和复方新诺明六种抗菌药物的耐药率高于MSSHo，差异具有统计学意义(P＜0.05）。　　4.TCP实验显示，55株血液来源人葡萄球菌中，生物被膜阳性35株，占63.6％，阴性20株，占36.4％。　　5.生物被膜组细菌对16种抗菌药物的耐药率与非生物被膜组间不存在差异(P＞0.05)。　　6.psm-mec基因在MRSHo中的检出率为39.13％(18/46)，在MSSHo中未检出。18株psm-mec基因阳性的菌株均扩增出fudoh，测序结果经Blast比对显示，均与psm-mec基因编码序列完全匹配。　　7.携带psm-mec基因的人葡萄球菌产生物被膜率为83.33％(15/18)，高于未携带psm-mec基因人葡萄球菌54.1％(20/37)的产生物被膜率，差异具有统计学意义(P＜0.05)。分析fudoh基因测序结果发现，3株携带psm-mec未产生物被膜的菌株中，2株在psm-mec上游-12处单碱基突变(G＞A)。携带psm-mec基因菌株较未携带psm-mec菌株更易对β-内酰胺类、四环素和复方新诺明耐药，差异具有统计学意义(P＜0.05）。　　8.所有18株psm-mec阳性菌株，mecR1/ psm-mec和psm-mec/xylR两段基因间隔序列扩增均阳性。　　9.18株携带psm-mec基因的SCCmec型别检测显示，2(11.1％)株为典型SCCmecⅢ型（ⅢA，ⅢB各一株），16(88.9％)株无法分型，其中，4株为类ⅢA型（ⅢA-Tn554/orfX），3株为类ⅢB型（2株ⅢB+pls，1株ⅢB-IS431-Pub110），9株为SCCmec新型别。　　10.携带psm-mec基因菌株的mec与ccr型别检测显示，18株菌株均为Class Amec;11株扩增出ccr，其中6株为ccr type1，1株为ccr type1+2，2株为ccr type1+3，其余7株未扩增出ccr。　　结论:　　1.血液来源人葡萄球菌甲氧西林耐药率高，耐甲氧西林菌株易同时对环丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、四环素和复方新诺明耐药。　　2.血液来源人葡萄球菌生物被膜能力形成强，生物被膜组细菌耐药谱与非生物被膜组间无差异。　　3.定位于mecR1与xylR间的psm-mec基因广泛存在血液来源的SCCmecⅢ亚型、变异型和新型别人葡萄球菌中。　　4.血液来源人葡萄球菌中，携带psm-mec基因的SCCmec元件具有多样性，其组成中，mec保守，均为ClassA类，而ccr高度变异。　　5.在血液来源人葡萄球菌中，携带psm-mec基因较未携带psm-mec基因的菌株生物被膜形成能力更强，psm-mec基因与生物被膜的形成存在相关性，同时携带psm-mec基因的菌株更易对β-内酰胺类、四环素和复方新诺明耐药。

目录

摘要

前言

第一部分 临床分离血液来源人葡萄球菌耐药性及生物被膜形成能力的检测

材料和仪器

实验方法

结果

讨论

第二部分 SCCmec伴随基因psm-mec的分子特征及与生物被膜及耐药性的相关性

材料与仪器

实验方法

结果

讨论

总结

参考文献

致谢

英汉缩略语名词对照

凝固酶阴性葡萄球菌生物被膜形成机制

攻读硕士期间发表的文章

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