Artemin受Her2调节并介导Her2阳性性乳腺癌Herceptin抗性

摘要

Artemin属于胶质细胞源性神经营养因子家族主要成员之一，根据相关文献的报道，Artemin在乳腺癌中扮演着原癌基因的角色，并且受到雌激素的调控。
　　 Her2蛋白是由原癌基因C-erbB2编码的蛋白，是表皮生长因子受体酪氨酸激酶家族的一个成员，Her2在乳腺癌的发病过程中起着重要的作用，在大约20％-30％的乳腺癌病人中都有Her2的过量表达，并且其表达与病人的预后呈显著的负相关。Her2蛋白通过与配体或者外界的信号分子相互作用，激活自身的酪氨酸激酶活性，从而调控有关信号转导系统，进而调控细胞的有关生物学行为，如生长、增殖、侵润和转移等。
　　 本文通过研究发现，Artemin在乳腺癌中是Her2下游一个重要的效应因子，通过表皮生长因子或者脑红蛋白激活Her2可以提高乳腺癌细胞中Artemin的表达;Herceptin，针对Her2的特定人源化单克隆抗体，用其处理阻断细胞中的Her2信号能够使Artemin的表达显著下调;在Her2过表达的乳腺癌病人中，Her2的表达与Artemin表达呈正相关，Artemin表达受Her2调节。
　　 在Her2过表达的乳腺癌细胞SKBR3和BT474中，Artemin的过表达减少细胞对Herceptin的敏感性。裸鼠体内异种成瘤实验也证明这一结果。另外，用小分子干扰RNA下调Artemin表达后，增强了Herceptin对Her2过表达细胞的杀伤作用。
　　 Artemin的过量表达能够诱导Her2阳性乳腺癌细胞产生Herceptin抗性，Artemin的功能阻断能够恢复Herceptin抗性细胞对Herceptin的敏感性;Herceptin抗性的产生与AKT和MAPK信号分子的磷酸化效应有关。因此，Artemin的功能性拮抗体可以作为Her2过表达乳腺癌病人的辅助治疗方案，提高Herceptin治疗乳腺癌的效率。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 乳腺癌概述

1．1．1 乳腺癌发生原因

1．1．2 我国乳腺癌的现状

1．1．3 乳腺癌的常见信号

1．1．4 乳腺癌的常用治疗手段

1．2 与乳腺癌相关的一些分子

1．2．1 人表皮生长因子受体2(Her2)

1．2．2 Artemin

1．3 Herceptin

1．3．1 Herceptin基本概况

1．3．2 Herceptin作用机理

1．3．3 Herceptin抗性

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验试剂

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验试剂配制

2．2 实验方法

2．2．1 乳腺癌细胞的培养

2．2．2 探究Her2与Artemin在乳腺癌中的关系

2．2．3 探究Herceptin对Artemin表达的影响

2．2．4 探究Artemin与Herceptin抗性的关系

2．2．5 Artemin功能鉴定

2．2．6 裸鼠异体成瘤实验

2．2．7 Herceptin抗性细胞株的培养与检测

2．2．8 抗性细胞系的Artemin的检测

2．2．9 抗性细胞系中信号分子磷酸化检测

第3章 实验结果与分析

3．1 乳腺癌细胞中Her2与Artemin的关系

3．1．1 Artemin的Q-PCR检测

3．1．2 Artemin的蛋白质印记检测

3．2 探究Herceptin对Artemin表达的影响

3．2．1 Herceptin作用下Artemin的mRNA表达

3．2．2 Herceptin作用下Artemin的蛋白质表达

3．3 乳腺癌组织中Her2与Artemin的关系

3．4 构建稳定转染细胞系

3．5 Artemin功能检测

3．5．1 MTT Assay检测细胞活力

3．5．2 Soft Agar检测细胞成瘤能力

3．6 裸鼠异体成瘤实验

3．7 Herceptin抗性细胞系的检测

3．8 抗性细胞系中Artemin的检测

3．9 抗性细胞系中信号分子磷酸化检测

3．10 实验结论

参考文献

致谢