本研究首次测定了枪贼科六种乌贼,包括中国乌贼 chinensis)、日本枪乌贼(Loliolus japonica)、尤氏小枪乌贼(Loliolus uyii)以杜氏枪乌贼( Uroteuthis duvauceli)、乳光枪乌贼(Doryteuthis.opalescens)以及火枪乌贼{Loliolus Sek)的线粒体基因组全序列。对六种枪乌贼功能基因进行注释与特征分析。最后分别用16S R N A、 control region以及全基因组序列通过M L法构建系统发育树来分析9种枪乌贼的系统发育关系,为枪乌贼科的分类及进化提供分子水平的依据。主要研究结果如下: 1.本研究扩增所得的枪乌贼线粒体基因组全长范围介于17134-17485bp之间,6种枪乌贼科乌贼基因排列顺序相同,长度比较一致。六种枪乌贼均由13个蛋白质编码基因、22个tRNA基因、2个r R N A基因以及3个非编码区组成。6种枪乌贼包含有两种r R N A,分别是16 S r R N A和12SrRNA。其中16SrRNA位于〖狀入&与 tRNAVal之间,12 S r R N A位于tRNAVal与 tRNATrP之间。 2.六种枪乌贼均存在基因间隔与基因重叠区域,基因间隔最短的lbp,最长达410bp,基因重叠最短lbp,最长达29 b p。在碱基含量方面,六种枪乌贼的A碱基在40%左右,T碱基在31%左右,C碱基在18%左右,G碱基在7-11%之间,A+T%的含量71-72%之间,表现出明显的A T偏向性,与枪乌贼科其它物种的特征一致。枪乌贼的蛋白编码基因的核苷酸序列长度从11193到11223bp,分别占基因组长度的65.326%及65.208%,编码蛋白可以分为两个类型:C O X3, ND2, COX1, COX2, ATP8, ATP6, ND4以及ND3落在轻链上,ND1,ND5,ND4L, CYTB,ND6落在重链上。CYTB,ND1,ND5,ND4L以及ND6以ATG作为起始密码子,而N D4以T A T作为终止子,COX3, ND2, COX1, COX2, N D3以及ATP6以 T A A作为终止密码子,Cytb,ND6,NDl,N D5以作为终止密码子,而N D4以及ND4L使用CTA作为密码子,ATP8以T A G作为终止密码子。基因间还存在着序列重复现象, N A D2以及COI重复了29对碱基。ND4L和 ND4重复了7碱基,tRNAHis以及tRNA1^重复了3碱基。 3.六种乌贼均包含三个几乎完全相同非编码区(也被称为控制区)。总长度为1409bp到1570bp,六者相似度为66.62%。推测此区域的长短可能是造成六种乌贼线粒体基因组全序列长度差异的主要原因。 4.基于线粒体全基因组序列和16SRNA基因构建进化树,结果比较一致。结果显示,本研究中六种枪乌贼的分支分类情况与传统形态学分类比较一致,而其它学者分类结果存在分歧。都支持枪乌贼共分为两大支,进化树中中国枪乌贼与剑尖枪乌贼聚为一支,日本枪乌贼、火枪乌贼以及尤氏枪乌贼聚为一支,莱氏拟乌贼处于该系统进化树的底部。莱氏拟乌贼及剑尖枪乌贼的分类状况仍存在争议,笔者推测在枪乌贼科内可能还存在一个未知的属或亚属。 本研究首次测定了中国枪乌贼、日本枪乌贼、尤氏小枪乌贼、杜氏枪乌贼、乳光枪乌贼以及火枪乌贼的线粒体基因组全序列,并对其进行了基因注释以及基因结构和特征的分析,进一步丰富了NCBI的基因组数据库,并引入线粒体全基因组序列来分析枪乌贼科的系统进化关系,将为头足纲更高阶元的系统发生学研究奠定良好的基础。
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